蛋白質含量測定方法匯總-資料下載頁
2025-11-08 22:17本頁面
【正文】 定液必須澄清，以免造成結果誤差。3．本法需用石英比色杯。[思考題]1．為什么紫外吸收法可作為蛋白質定量測定方法？其理論依據(jù)是什么？2．此法測定蛋白質具有什么特點？實驗二十一 紫外光吸收法測定蛋白質濃度 目的和要求 了解紫外吸收法測定蛋白質濃度的原理。熟悉紫外分光光度計的使用。原理 蛋白質組成中長含有酪蛋白和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波長處有最大吸收峰，一定濃度范圍內其濃度與吸光度成正比，故可用紫外分光光度計通過比色來測定蛋白質的含量。由于核酸在280nm波長處也有光吸收，對蛋白質測定有一定的干擾作用，但核酸的最大吸收峰在260nm處。如同時測定260nm的光吸收，通過計算可以消除其對蛋白質測定的影響。因此如溶中存在核酸時必須同時測定280nm及260nm的吸光度，方可通過計算測得溶液中的蛋白質濃度。操作步驟 在紫外分光光度計上，將未知的蛋白質溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對照，測得280nm和260nm兩種波長的吸光度（A280nm及A260nm）。將A280nm及A260nm波長處測得的吸光度按下列公式計算蛋白質濃度。C= －式中C：蛋白質質量濃度（mg/ml）；A280nm：蛋白質溶液在280nm處測得的吸光度；A260nm：蛋白質溶液在260nm處測得的吸光本法對微量蛋白質的測定既快又方便，它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時用其他方法測定往往較困難。為方便起見對于混合蛋白質溶液，（mg/ml）。（二）標準曲線 標準曲線的繪制取8支干凈試管，編號，按下表加入試劑。管號試劑012345671mg/ml卵清蛋白標準液/ml蒸餾水/ml蛋白濃度/（mg/ml）A280nm000加畢，用紫外分光光度計測A280nm，以吸光度為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標作圖。 樣液測定， ml，測A280nm，對照標準曲線求得蛋白質濃度。試劑和器材一、試劑 1. 卵清蛋白標準液：%NaCl溶液，離心，取上清液，用克氏定氮法測定其蛋白質含量。根據(jù)測定結果，%NaCl溶液稀釋卵清蛋白溶液，使其蛋白質含量為1mg/ml。亦可用1mg/ml的牛血清白蛋白溶液。2. 未知濃度蛋白質溶液：用酪蛋白配制，～?；蛴孟♂屟宕妫?，用生理鹽水稀釋至刻度。 %NaCl。二. 器材1. 752型分光光度計?！?. 容量瓶50ml（1）?！?5cm(9)。4. （1）、 ml（3）、（2）、（2）。思考題??？其基本原理是什么? ，應如何校正? 內容總結
（1）實驗七蛋白質含量測定
測定蛋白質的定量方法有很多，目前常用的有染料法，雙縮脲(Biuret)法，酚試劑法(Lowry)法及紫外吸收法
（2）該法近年在某些方面有取代經典的Lowry法趨勢，因為它操作簡單，反應時間短，染料蛋白質顏色穩(wěn)定，抗干擾性強
（3）3．本法各種蛋白質的顯色程度基本相同，重復性好，幾乎不受溫度影響，唯一缺點是靈敏度較低
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