蛋白質(zhì)含量測定方法匯總(更新版)
【正文】 ml）\管號01234567蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/ml）蒸餾水00此法的特點是測定蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多，在用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定蛋白質(zhì)含量時，對那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。紫外吸收法簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定后仍能回收使用。四、紫外吸收法[實驗原理][注意事項]，而堿性銅試劑是在堿性條件下與蛋白質(zhì)相互作用，所以當(dāng)加入酚試劑后，應(yīng)迅速搖勻（加一管搖一管），使還原反應(yīng)發(fā)生在磷鉬酸磷鎢酸試劑被破壞之前。以測定管吸光度值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血清蛋白質(zhì)含量。使用前，以酚酞為指示劑，求出酚試劑的摩爾濃度。?5H2O反應(yīng)式一[思考題]以測定管的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得蛋白質(zhì)濃度。[操作步驟]2．標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液： 用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)晶牛血清清蛋白（BSA）或標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白，配制成10g/L的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，可用BSA濃度1g/。主要的缺點是靈敏度差。本法的缺點是：對于那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白氨基酸組成有較大差異的蛋白質(zhì)，有一定誤差，因為不同的蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合是不同的，故該法適合測定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相近的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)含量測定2．了解染料法、雙縮脲法、Lowry法和紫外吸收法測定原理。：稱取考馬斯亮藍(lán)G250凡分子中含二個或二個以上酰胺基(—CONH2)，或與此相似的基團(tuán)[如—CH2NH2，—CSNH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，無論這類基團(tuán)直接相連還是通過一個碳或氮原子間接相連，均可發(fā)生上述反應(yīng)。5H20(.)(.)，／L%NaCl配制，酒石酸鉀鈉與CuSO41．雙縮脲法測定蛋白質(zhì)的原理是什么?其它還有什么方法測定蛋白質(zhì)的含量?2．請用雙縮脲法，設(shè)計一個測定蛋白質(zhì)含量的定量方法(除標(biāo)準(zhǔn)曲線法外)。烯醇化反應(yīng)此液需現(xiàn)用現(xiàn)配。試劑放置過久，變成綠色時，可再加溴數(shù)滴煮15分鐘，如能恢復(fù)原有的金黃色仍可使用。（2）蛋白合成增加，大多數(shù)發(fā)生多發(fā)性骨髓瘤患者中，主要是血清球蛋白增加。但如控制在低濃度范圍內(nèi)，則不影響測定，Lowry法很靈敏，可以對5～100μg蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行很好的顯色反應(yīng)，而如此低的蛋白質(zhì)濃度常常已把干擾物質(zhì)的濃度稀釋到一個不起作用的水平。核酸的干擾可以通過查校正表，再進(jìn)行計算的方法，加以適當(dāng)?shù)男Ｕ?。?80nm處測定各管溶液的吸光度值。熟悉紫外分光光度計的使用。= －式中C：蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）；A280nm：蛋白質(zhì)溶液在280nm處測得的吸光度；A260nm：蛋白質(zhì)溶液在260nm處測得的吸光本法對微量蛋白質(zhì)的測定既快又方便，它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時用其他方法測定往往較困難。試劑和器材一、試劑 1. 卵清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：%NaCl溶液，離心，取上清液，用克氏定氮法測定其蛋白質(zhì)含量?！?. 容量瓶50m
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