蛋白質(zhì)含量測定方法匯總-閱讀頁
2024-11-17 22:17本頁面
【正文】 20min酚試劑以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。[臨床意義]：（1）血清中水分減少，而使蛋白濃度相對增高。（2）蛋白合成增加，大多數(shù)發(fā)生多發(fā)性骨髓瘤患者中，主要是血清球蛋白增加。（2）蛋白質(zhì)丟失，如嚴(yán)重灼傷時，大量血漿滲出；腎病綜合癥時，尿液中長期丟失蛋白質(zhì)等。（4）血液中水分增加，血漿被稀釋，因各種原因引起的水鈉潴留或輸注過多低滲溶液。但如控制在低濃度范圍內(nèi)，則不影響測定，Lowry法很靈敏，可以對5～100μg蛋白質(zhì)樣品進行很好的顯色反應(yīng)，而如此低的蛋白質(zhì)濃度常常已把干擾物質(zhì)的濃度稀釋到一個不起作用的水平。，若超過此范圍需要將血清酌情稀釋。[思考題]？？應(yīng)如何注意？吸收高峰在280nm處，其吸光度（即光密度值）與蛋白質(zhì)含量成正比。利用一定波長下，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān)系，可以進行蛋白質(zhì)含量的測定。低濃度的鹽，例如生化制備中常用的（NH4）2SO4等和大多數(shù)緩沖液不干擾測定。故該法適于用測定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。核酸的干擾可以通過查校正表，再進行計算的方法，加以適當(dāng)?shù)男Ｕ４送?，進行紫外吸收法測定時，由于蛋白質(zhì)吸收高峰常因pH的改變而有變化，因此要注意溶液的pH值，測定樣品時的pH要與測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的pH相一致。2．紫外分光光度計。在280nm處測定各管溶液的吸光度值。，在280nm處測得吸光度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。2.3．本法需用石英比色杯。熟悉紫外分光光度計的使用。由于核酸在280nm波長處也有光吸收，對蛋白質(zhì)測定有一定的干擾作用，但核酸的最大吸收峰在260nm處。因此如溶中存在核酸時必須同時測定280nm及260nm的吸光度，方可通過計算測得溶液中的蛋白質(zhì)濃度。將A280nm及A260nm波長處測得的吸光度按下列公式計算蛋白質(zhì)濃度。= －式中C：蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）；A280nm：蛋白質(zhì)溶液在280nm處測得的吸光度；A260nm：蛋白質(zhì)溶液在260nm處測得的吸光本法對微量蛋白質(zhì)的測定既快又方便，它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時用其他方法測定往往較困難。（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線管號試劑012345671mg/ml卵清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液/ml蒸餾水/ml蛋白濃度/（mg/ml）A280nm000試劑和器材一、試劑 1. 卵清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：%NaCl溶液，離心，取上清液，用克氏定氮法測定其蛋白質(zhì)含量。亦可用1mg/ml的牛血清白蛋白溶液?；蛴孟♂屟宕妫?，用生理鹽水稀釋至刻度。 %NaCl?！?. 容量瓶50ml（1）。4. （1）、 ml（3）、（2）、（2）。內(nèi)容總結(jié)
（1）實驗七蛋白質(zhì)含量測定
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