蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法匯總-wenkub
2024-11-17 22 本頁(yè)面
【正文】 相當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)（g/L）01020304050[器材]如有需要，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)還可預(yù)先用微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白氮含量，計(jì)算出其純度，再根據(jù)其純度，稱(chēng)量配制成標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。然后加水至1000ml。因此雙縮脲法常用于快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。測(cè)定范圍為1～10mg蛋白質(zhì)。二、雙縮脲(Biuret)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量按上表分別向各支試管內(nèi)加入各種試劑，充分混勻，5min后在595nm波長(zhǎng)處以0號(hào)管調(diào)零,測(cè)定各管吸光度值（A）。[操作步驟]1．[器材]吸量管； 試管；721型分光光度計(jì)[試劑]：。一、染料法[實(shí)驗(yàn)原理]在酸性溶液中染料考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，此時(shí)考馬斯亮藍(lán)G250顏色從紅色變?yōu)樗{(lán)色，吸收高峰從460nm移至595nm。測(cè)定蛋白質(zhì)的定量方法有很多，目前常用的有染料法，雙縮脲(Biuret)法，酚試劑法(Lowry)法及紫外吸收法。實(shí)驗(yàn)七[目的要求]1．掌握測(cè)定蛋白質(zhì)的含量基本方法。利用這個(gè)原理可以測(cè)定蛋白質(zhì)含量。以吸光度值為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。[實(shí)驗(yàn)原理]在堿性溶液中，雙縮脲(H2NCONHCONH2)與二價(jià)銅離子作用形成紫紅色的絡(luò)合物，這一反應(yīng)稱(chēng)雙縮脲反應(yīng)。干擾這一測(cè)定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。[試劑]1．雙縮脲試劑： 取CuSO4棕色瓶中避光保存。牛血清清蛋白用H2O1．試管：15150mm混勻，37℃水浴20分鐘，冷卻至室溫，在分光光度計(jì)波長(zhǎng)540nm處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度值。5H20不穩(wěn)定形成Cu(OH)2沉淀。3．本法各種蛋白質(zhì)的顯色程度基本相同，重復(fù)性好，幾乎不受溫度影響，唯一缺點(diǎn)是靈敏度較低。同時(shí)蛋白質(zhì)肽鍵發(fā)生烯醇化反應(yīng)（反應(yīng)式二）能使鉬離子在pH10時(shí)螯合在肽結(jié)構(gòu)中，形成復(fù)合物，從而使電子轉(zhuǎn)移到混合酸的顯色劑上，大大增加了酚試劑對(duì)蛋白質(zhì)的敏感性。3H2OP2O5?13WO3?5MoO3?10H2O3H2OP2O5?14WO2?4MoO2?10H2ONaOH溶液100ml中。臨用前取甲液50ml，乙液1ml混合，即為堿性銅試劑。3．樣品：，置于50ml容量瓶中，%NaCl溶液稀釋至刻度處，混勻，為待測(cè)血清樣品。（滴定時(shí)可將酚試劑稀釋?zhuān)悦忸伾绊懀??；靹?，室溫放?0min后，以0管調(diào)零點(diǎn)，在波長(zhǎng)650nm比色，分別讀取各管吸光度值。如急性失水時(shí)（嘔吐、腹瀉、高熱）；休克時(shí)，由于毛細(xì)管通透性的變化，血漿也發(fā)生濃縮等。（3）營(yíng)養(yǎng)不良或長(zhǎng)期消耗性疾病，如嚴(yán)重結(jié)核或長(zhǎng)期消耗性疾病。、磷鎢酸的顯色反應(yīng)是由于和還原物質(zhì)的還原反應(yīng)而引起的，因此本法可受很多還原性物質(zhì)的干擾，如帶有SH的化合物，糖類(lèi)、酚類(lèi)等甚至有些緩沖劑（如Tris）也能干擾測(cè)定。、靈敏度高，缺點(diǎn)是試劑只與蛋白質(zhì)中半胱氨酸、色氨酸等起反應(yīng)，因此
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1