血清蛋白質(zhì)濃度定量測(cè)定-wenkub
2023-01-21 09:07:24 本頁面
【正文】 編號(hào)，按下表操作： ： 同繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法，在一支試管中加入待測(cè)樣品 ，然后加入，立即在漩渦混合器上混合，測(cè)吸光度 A，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待測(cè)樣品中蛋白質(zhì)濃度（ g/L）。 操作步驟 ? 1. 先將 solutionA 搖晃混勻，根據(jù)樣品數(shù)量，按 50體積 solution A加 1體積 solutionB試劑（ 50:1）配制成 BCA工作液，充分混勻。BCA與 Cu+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在 562 nm處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。BCA 法定量蛋白質(zhì)濃度 ? BCA法是近來廣為應(yīng)用的蛋白定量方法。 ? 【 試劑 】 ? 試劑 A： ? 分別稱取 10g BCA二鈉鹽、 20g無水碳酸鈉、 、 4g氫氧化鈉 、 酸氫鈉，混合調(diào) PH值至 ，加水至 1L。BCA工作液在 24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。 ? 【 優(yōu)缺點(diǎn) 】 ? (一 ) 操作簡(jiǎn)單，快速， 45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的 Lowary法快 4倍且更加方便； ? (二 ) 準(zhǔn)確靈敏，試劑穩(wěn)定性好， BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是 20200μg/ml，微量 BCA測(cè)定范圍在 。 檢測(cè)濃度下限達(dá)到 25 微克 /毫升，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 ，待測(cè)樣品體積為 1～ 20微升。12H2O ? KCI ? 將上列試劑按次序加入定量容器中，加適量蒸餾水溶解后，再定容至 1000mL，調(diào) pH值至 , 高壓消毒滅菌 112Kpa20min，冷卻后，保存于 4℃ 冰箱中備用。 ? 總之，雖然蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法很多，但是，還沒有一個(gè)完美的方法。
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