凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量-wenkub
2023-05-24 16:54:41 本頁面
【正文】 篩子，小的分子可以進入凝膠網(wǎng)孔，而大的分子則排阻于顆粒之外。 ? 學(xué)習(xí)利用凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的實驗技能。 實驗原理 ? 凝膠層析法也稱分子篩層析法，是利用具有一定孔徑大小的多孔凝膠作固定相的層析技術(shù)。當(dāng)含有分子大小不一的蛋白質(zhì)混合物樣品加到用此類凝膠顆粒裝填而成的層析柱上時，這些物質(zhì)即隨洗脫液的流動而發(fā)生移動。 如果假定蛋白質(zhì)分子近于球形，同時沒有顯著的水合作用，則不同大小分子量的蛋白質(zhì)，在洗脫時峰的位置和該物質(zhì)相對分子質(zhì)量有直接的定量的關(guān)系。它是自加樣品開始到該組分的洗脫峰（峰頂）出現(xiàn)時所流出的體積。在本實驗中用于分離胰島素（ Mr為6000）和牛血清蛋白（ Mr75000）。待溶脹平衡后用傾瀉法除去不易沉下的細(xì)小顆粒，最后凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準(zhǔn)備裝柱。 將洗脫劑與恒流泵相連，恒流泵出口端與層析柱相連。先打開柱的出口，待柱中洗脫液流至距床表面 1～ 2mm時，關(guān)閉出口，用滴管將 1ml樣品慢慢地加至柱床表面，應(yīng)避免將床面凝膠沖起，打開出口并開始計算流出體積，當(dāng)樣品滲入床中接近床表面 1mm時關(guān)閉出口。 ? 4. 收集與鑒定 用自動部分收集器收
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