凝膠層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量-閱讀頁
2025-06-02 16:54本頁面
【正文】 裝柱前須將凝膠上面過多的溶液傾出，將層析柱垂直裝好。裝柱要求連續(xù)、均勻、無氣泡、無 “ 紋路 ” 。通過 2— 3倍柱床容積的洗脫液使柱床平衡，然后在凝膠表面上放一片濾紙或尼龍濾布，以防將來在加樣時(shí)凝膠被沖起，并始終保持凝膠上端有一段液體。上樣時(shí)應(yīng)盡量保持床面的穩(wěn)定。按加樣操作，用少量（約 1ml）洗脫液沖洗管壁 2次。上樣的體積，分析用量為柱床容積的 1— 2%；制備用量為柱床容積的20%~30%。 ? 5．凝膠柱的處理 凝膠用過后，反復(fù)用蒸餾水洗后保存，如果有顏色或比較臟，可用 滌。建議長(zhǎng)期用干燥狀態(tài)保存。只要測(cè)得幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的 Ve，并以它們的相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)(logMr)對(duì) Ve作圖得一直線，再測(cè)出待測(cè)樣品的 Ve，即可從圖中確定它的相對(duì)分子質(zhì)量。注意恒壓瓶?jī)?nèi)的排氣管應(yīng)無液體，并隨著柱下口溶液的流出不斷有氣泡產(chǎn)生，則表示恒壓瓶不漏氣。 ? 始終保持柱內(nèi)液面高于凝膠表面，否則水分揮發(fā)，凝膠變干。 思考題 ? 生化實(shí)驗(yàn)中常用的凝膠有哪些種類？各有何特點(diǎn)？ ? 凝膠層析除用于測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量外，還有何用途？ ? 比較電泳和層析測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的差
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