蛋白質含量測定方法匯總-文庫吧
2025-11-03 22:17 本頁面
【正文】 量配制成標準蛋白質溶液。牛血清清蛋白用H2O%NaCl配制，NaOH配制。[器材]1．試管：15150mm試管7只 ；2．1ml，5ml移液管；3．坐標紙 ；4．721分光光度計。[操作步驟]取試管7支，編號，按下表操作：試劑(ml)\管號空白管12345測定管蛋白標準液（10g/L）生理鹽水待測樣品雙縮脲試劑相當?shù)鞍踪|（g/L）01020304050混勻，37℃水浴20分鐘，冷卻至室溫，在分光光度計波長540nm處，用空白管調零，讀取各管吸光度值。1～5為標準曲線管，測得吸光度后，以吸光度為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標繪制標準曲線。以測定管的吸光度，在標準曲線上求得蛋白質濃度。[注意事項]1．雙縮脲試劑中，加入酒石酸鉀鈉，Cu2+形成穩(wěn)定的絡合銅離子，以防止CuSO45H20不穩(wěn)定形成Cu(OH)2沉淀。酒石酸鉀鈉與CuSO45H20之比不低于3∶1，加入KI作為抗氧化試劑。2．雙縮脲試劑要封閉貯存，防止吸收空氣中的二氧化碳。3．本法各種蛋白質的顯色程度基本相同，重復性好，幾乎不受溫度影響，唯一缺點是靈敏度較低。4．黃疸血清、嚴重溶血對本法有明顯干擾。[思考題]1．雙縮脲法測定蛋白質的原理是什么?其它還有什么方法測定蛋白質的含量?2．請用雙縮脲法，設計一個測定蛋白質含量的定量方法(除標準曲線法外)。三、酚試劑法測定血清蛋白質含量（改良Lowry法）[實驗原理]蛋白質分子中所含肽鍵在堿性條件下與銅絡合生成復合物產(chǎn)生紫紅色化合物（雙縮脲反應），同時使肽鏈展開，蛋白質中半胱氨酸、絡氨酸、色氨酸和組氨酸均能使鎢酸、鉬酸同時失去1個，2個或者3個氧原子，還原成多種還原型的混合酸，并且有特殊的藍顏色（最大吸收峰波長為745～750nm,反應式一）其藍色深淺與蛋白質含量在一定范圍內成正比，由此可測出樣品中蛋白質的含量。同時蛋白質肽鍵發(fā)生烯醇化反應（反應式二）能使鉬離子在pH10時螯合在肽結構中，形成復合物，從而使電子轉移到混合酸的顯色劑上，大大增加了酚試劑對蛋白質的敏感性。反應式一3H2OP2O5?13WO3?5MoO3?10H2O3H2OP2O5?14WO3?4MoO3?10H2O1
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1