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蛋白質含量測定方法匯總(專業(yè)版)

2025-11-22 22:17上一頁面

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【正文】  2. 容量瓶50ml(1)。= -式中C:蛋白質質量濃度(mg/ml);A280nm:蛋白質溶液在280nm處測得的吸光度;A260nm:蛋白質溶液在260nm處測得的吸光本法對微量蛋白質的測定既快又方便,它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況,這時用其他方法測定往往較困難。在280nm處測定各管溶液的吸光度值。但如控制在低濃度范圍內,則不影響測定,Lowry法很靈敏,可以對5~100μg蛋白質樣品進行很好的顯色反應,而如此低的蛋白質濃度常常已把干擾物質的濃度稀釋到一個不起作用的水平。試劑放置過久,變成綠色時,可再加溴數(shù)滴煮15分鐘,如能恢復原有的金黃色仍可使用。烯醇化反應1.雙縮脲法測定蛋白質的原理是什么?其它還有什么方法測定蛋白質的含量?2.請用雙縮脲法,設計一個測定蛋白質含量的定量方法(除標準曲線法外)。5H20(.)(.),/L2.了解染料法、雙縮脲法、Lowry法和紫外吸收法測定原理。本法的缺點是:對于那些與標準蛋白氨基酸組成有較大差異的蛋白質,有一定誤差,因為不同的蛋白質與染料的結合是不同的,故該法適合測定與標準蛋白質氨基酸組成相近的蛋白質。2.標準蛋白質溶液: 用標準的結晶牛血清清蛋白(BSA)或標準酪蛋白,配制成10g/L的標準蛋白溶液,可用BSA濃度1g/。以測定管的吸光度,在標準曲線上求得蛋白質濃度。反應式一?5H2O以測定管吸光度值,查標準曲線求得血清蛋白質含量。四、紫外吸收法[實驗原理]此法的特點是測定蛋白質含量的準確度較差,干擾物質多,在用標準曲線法測定蛋白質含量時,對那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質,有一定的誤差。測定液必須澄清,以免造成結果誤差。加畢,用紫外分光光度計測A280nm,以吸光度為縱坐標,蛋白質濃度為橫坐標作圖。2. 未知濃度蛋白質溶液:用酪蛋白配制,~。如同時測定260nm的光吸收,通過計算可以消除其對蛋白質測定的影響。[試劑器材]1.蛋白質標準液(1mg/ml): 準確稱量經(jīng)微量凱氏定氮法校正的標準蛋白質配制。此外,蛋白質溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。(3)營養(yǎng)不良或長期消耗性疾病,如嚴重結核或長期消耗性疾病。3.樣品:,置于50ml容量瓶中,%NaCl溶液稀釋至刻度處,混勻,為待測血清樣品。3.本法各種蛋白質的顯色程度基本相同,重復性好,幾乎不受溫度影響,唯一缺點是靈敏度較低。1.試管:15150mm干擾這一測定的物質主要有:硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。實驗七[操作步驟]1.測定范圍為1~10mg蛋白質。[器材]2.雙縮脲試劑要封閉貯存,防止吸收空氣中的二氧化碳。mg/ml):精確稱取結晶牛血清清蛋白25mg,%NaCl溶液中,以容量瓶定容至100ml。(2)蛋白質丟失,如嚴重灼傷時,大量血漿滲出;腎病綜合癥時,尿液中長期丟失蛋白質等。吸收高峰在280nm處,其吸光度(即光密度值
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