蛋白質(zhì)含量測定方法匯總(文件)
【正文】 可因各種蛋白質(zhì)中含這幾種氨基酸的量不同使顯色強(qiáng)度稍有不同。此外，蛋白質(zhì)溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。特別適用于柱層析洗脫液的快速連續(xù)檢測，因為此時只需測定蛋白質(zhì)濃度的變化，而不需知道其絕對值。若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物質(zhì)，會出現(xiàn)較大的干擾。[試劑器材]1．蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/ml）： 準(zhǔn)確稱量經(jīng)微量凱氏定氮法校正的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)配制?；靹?。[注意事項]，因此要注意保持待測蛋白質(zhì)溶液的pH值與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液一致。[思考題]1．為什么紫外吸收法可作為蛋白質(zhì)定量測定方法？其理論依據(jù)是什么？2．此法測定蛋白質(zhì)具有什么特點？實驗二十一 紫外光吸收法測定蛋白質(zhì)濃度 目的和要求 了解紫外吸收法測定蛋白質(zhì)濃度的原理。如同時測定260nm的光吸收，通過計算可以消除其對蛋白質(zhì)測定的影響。C 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取8支干凈試管，編號，按下表加入試劑。 樣液測定， ml，測A280nm，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得蛋白質(zhì)濃度。2. 未知濃度蛋白質(zhì)溶液：用酪蛋白配制，～。二. 器材1. 752型分光光度計。思考題 ？其基本原理是什么? ，應(yīng)如何校正?
測定蛋白質(zhì)的定量方法有很多，目前常用的有染料法，雙縮脲(Biuret)法，酚試劑法(Lowry)法及紫外吸收法
（2）該法近年在某些方面有取代經(jīng)典的Lowry法趨勢，因為它操作簡單，反應(yīng)時間短，染料蛋白質(zhì)顏色穩(wěn)定，抗干擾性強(qiáng)
（3）3．本法各種蛋白質(zhì)的顯色程度基本相同，重復(fù)性好，幾乎不受溫度影響，唯一缺點是靈敏度較低
?！?5cm(9)。根據(jù)測定結(jié)果，%NaCl溶液稀釋卵清蛋白溶液，使其蛋白質(zhì)含量為1mg/ml。加畢，用紫外分光光度計測A280nm，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)作圖。為方便起見對于混合蛋白質(zhì)溶液，（mg/ml）。操作步驟 在紫外分光光度計上，將未知的蛋白質(zhì)溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對照，測得280nm和260nm兩種波長的吸光度（A280nm及A260nm）。原理 蛋白質(zhì)組成中長含有酪蛋白和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波長處有最大吸收峰，一定濃度范圍內(nèi)其濃度與吸光度成正比，故可用紫外分光光度計通過比色來測定蛋白質(zhì)的含量。測定液必須澄清，以免造成結(jié)果誤差。以0號管調(diào)零，以蛋白質(zhì)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制出蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。[操作步驟]：取8支試管，按下表編號并加入試劑：試劑（ml）\管號01234567蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/ml）蒸餾水00但是因為不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測定的結(jié)果還是存在一定的誤差。此法的特點是測定蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多，在用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定蛋白質(zhì)含量時，對那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大
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