功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(專業(yè)版)
【正文】 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性 雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于核內(nèi) ,而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工 ,如糖基化 ,二硫鍵形成等 ,這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進(jìn)行。 ? cDNA庫(kù)是在噬菌體衣殼蛋白的基因中插入從某些組織或細(xì)胞中抽提出來的 mRNA的互補(bǔ) DNA片段，從而表達(dá)該組織或細(xì)胞的各種蛋白于噬菌體的表面。 芯片上排列了許多已知蛋白質(zhì)的單克隆抗體，這些單克隆抗體對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)（抗原）都是細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白，涉及信號(hào)傳導(dǎo)、腫瘤、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡等廣泛的領(lǐng)域。 ? 蛋白質(zhì)芯片技術(shù) ? 噬菌體展示技術(shù) ? 酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)芯片 蛋白質(zhì)芯片 是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面，形成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。 液相蛋白質(zhì)芯片 是一種新型的、高度靈活的多元蛋白質(zhì)研究平臺(tái)，可以適用于蛋白質(zhì)組研究、臨床研究和藥物研究中的各種蛋白質(zhì)分析。 酵母雙雜交系統(tǒng) ? 酵母雙雜交技術(shù)由 Fields等人于 1989年提出。 因此，雖然雙雜交系統(tǒng)可篩選出大量蛋白質(zhì)相互作用 ,但其中部分蛋白質(zhì)在生理狀態(tài)下可能不發(fā)生相互作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會(huì)誤入歧途。 GAL4重建后激活轉(zhuǎn)錄模式圖 BD AD X Y UAS 報(bào)告基因（ LacZ） ? 一般地 ,將 BDX的融合蛋白稱作 誘餌 (bait), X往往是已知蛋白 ,ADY稱作 獵物 (prey),能顯示誘餌和獵物相互作用的基因稱 報(bào)告基因 ,通過對(duì)報(bào)告基因的檢測(cè) ,反過來可判斷誘餌和獵物之間是否存在相互作用。 這一技術(shù)有效地實(shí)現(xiàn)了基因型和表型的體外轉(zhuǎn)換，即在二者之間架起了聯(lián)結(jié)的橋梁，使得研究者完全可以在分子克隆的基礎(chǔ)上，有效地實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)構(gòu)象的體外控制，從而可以在體外獲得具有良好生物學(xué)活性的表
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1