功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法-文庫吧在線文庫
【正文】 體為主要基質(zhì)，每種小球體上固定有不同的探針分子，將這些小球體懸浮于一個液相體系中，就構(gòu)成了一個液相蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)。因此，該系統(tǒng)最大程度地再現(xiàn)了細胞內(nèi)的真實情況，所篩選出的結(jié)合蛋白與自然狀態(tài)較為接近。 ? 該技術(shù)利用了酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4性質(zhì)， GAL4包括兩個彼此分離但功能上必需的結(jié)構(gòu)域 ,一個是位于 N端 1174位氨基酸殘基區(qū)段的 DNA結(jié)合(DNA binding domain,DNABD),另一個是位于 C端 768881位氨基酸殘基區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(Activation domain, AD）。 或結(jié)構(gòu)域 。 酵母雙雜交體系的新發(fā)展 ? 傳統(tǒng)酵母雙雜交體系的改建 根據(jù)酵母的營養(yǎng)缺陷 ,發(fā)展了多重篩選機制 表達載體構(gòu)建的改進 將蛋白的相互作用場所從核內(nèi)移至細胞膜 ? 哺乳動物細胞雙雜交系統(tǒng) ? 三雜交系統(tǒng)的產(chǎn)生：用于研究蛋白和 RNA間的相互作用。 假陽性分為兩類： 一類是生物學(xué)上的假陽性 即蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用在酵母細胞中發(fā)生 ,但是在其生物體細胞內(nèi)并不發(fā)生相互作用，這主要是因為兩種蛋白不同時表達或者二者根本不在同一組織中，這種假陽性 ,我們?nèi)绻麑λ芯康牡鞍踪|(zhì)的生物學(xué)特性沒有深入了解的話 ,是很難排除的。 ? 分別經(jīng)分子克隆技術(shù)在同一細胞中表達的 BD和AD多肽不會彼此間發(fā)生作用， BD和 AD分別可以同其他蛋白質(zhì) X或 Y結(jié)合形成融合蛋白 ,如果 X， Y之間可以形成蛋白 蛋白復(fù)合物 ,使 GAL4兩個結(jié)構(gòu)域重新構(gòu)成 AD和 BD成為一體 ,就可以啟動特異基因序列的轉(zhuǎn)錄。 2. 在篩選和制備多肽藥物方面的研究及應(yīng)用 隨機噬菌體展示多肽文庫： 一組隨機編碼序列或基因群插入噬菌體載體進行表達及展示時 ,就形成噬菌體展示文庫，在文庫中 ,每個噬菌體粒子只展示一種序列的外源肽鏈 ,不同噬菌體粒子展示不同序列的外源肽鏈。進而通過親和富集法篩選表達有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體，最終獲得具有特異結(jié)合性質(zhì)的多肽 /蛋白質(zhì)。 靶蛋白質(zhì)芯片 主要用于蛋白質(zhì)相互作用研究、蛋
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