功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法-預(yù)覽頁
【正文】 芯片上排列了許多已知蛋白質(zhì)的單克隆抗體，這些單克隆抗體對應(yīng)的蛋白質(zhì)（抗原）都是細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白，涉及信號傳導(dǎo)、腫瘤、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡等廣泛的領(lǐng)域。 ，然后利用不依賴細(xì)胞 的體外蛋白表達(dá)系統(tǒng) ， 在原位合成靶蛋白 。 ? 可同時固定各種蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物分子， 可以對同一個樣品中的多個不同的分子同時進(jìn)行檢測。 ? Navagen公司用 T7噬菌體構(gòu)建的各種 cDNA表達(dá)文庫，將外源基因序列插入到編碼 T7噬菌體包膜蛋白基因中，插入片段基因長度可在 300 bp ～ 3 000 bp之間，所表達(dá)的多肽或蛋白質(zhì)以與噬菌體包膜蛋白融合的形式展示在噬菌體表面，大小在50個～ 1 200個氨基酸。 ? cDNA庫是在噬菌體衣殼蛋白的基因中插入從某些組織或細(xì)胞中抽提出來的 mRNA的互補(bǔ) DNA片段，從而表達(dá)該組織或細(xì)胞的各種蛋白于噬菌體的表面。 3 在疾病的治療和致病機(jī)理方面的研究 有研究以 HCV非結(jié)構(gòu)蛋白 NS4A作為固相靶分子，用 T7噬菌體表面展示的人肝細(xì)胞 cDNA文庫進(jìn)行 5輪篩選后，確定了與 HCV非結(jié)構(gòu)蛋白 NS4A結(jié)合的是肝細(xì)胞蛋白絲裂原激活蛋白激酶（ MAPK）激活蛋白激酶 5（ MAPKAPK5），為進(jìn)一步研究HCV的致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 DNABD和 AD單獨(dú)作用均不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng) ,只有當(dāng)二者在空間上充分接近并呈現(xiàn)完整的 GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性時 ,方可激活 UAS下游啟動。 作為一種分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的簡便而有效的研究體系 ,酵母雙雜交的最大的優(yōu)點(diǎn)是不需要分離、純化蛋白質(zhì) ,整個過程只是對核酸進(jìn)行操作。 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性 雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于核內(nèi) ,而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工 ,如糖基化 ,二硫鍵形成等 ,這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進(jìn)行。 包括篩庫過程中自發(fā)升高的 BDx融合蛋白自我激活導(dǎo)致的假陽性，在 BDx融合蛋白不存在的情況下 ADY融合蛋白單獨(dú)激活報告基因，導(dǎo)致的假陽性 ,以及酵母中其他蛋白質(zhì)作用引起的假陽
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