功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(文件)
【正文】 異性的小肽或新型蛋白，這些肽段可以作為侯選藥物進(jìn)行開發(fā)。 ? DNABD能夠識別 GAL4效應(yīng)基因的上游激活序列 (Up stream activating sequence, UAS),并與之結(jié)合，而 AD則通過與轉(zhuǎn)錄機(jī)制中的其他成分之間的作用 ,啟動 UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。 GAL4重建后激活轉(zhuǎn)錄模式圖 BD AD X Y UAS 報告基因（ LacZ） ? 一般地 ,將 BDX的融合蛋白稱作 誘餌 (bait), X往往是已知蛋白 ,ADY稱作 獵物 (prey),能顯示誘餌和獵物相互作用的基因稱 報告基因 ,通過對報告基因的檢測 ,反過來可判斷誘餌和獵物之間是否存在相互作用。 互作用的候選蛋白質(zhì)。 另一類是技術(shù)上的假陽性 即由于雙雜交技術(shù)上的局限而鑒定出的蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用。 。 因此，雖然雙雜交系統(tǒng)可篩選出大量蛋白質(zhì)相互作用 ,但其中部分蛋白質(zhì)在生理狀態(tài)下可能不發(fā)生相互作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實驗驗證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會誤入歧途。另外 ,有些蛋白的正確折疊和功能有賴于其它非酵母蛋白的輔助 ,這限制了某些細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞膜受體蛋白等的研究。 酵母雙雜交系統(tǒng) 應(yīng)用 它主要應(yīng)用在以下幾個方面 : 是否有相互作用 。 ? 該系統(tǒng)中轉(zhuǎn)錄激活的條件是 蛋白質(zhì)作為一個整體 起作用。 酵母雙雜交系統(tǒng) ? 酵母雙雜交技術(shù)由 Fields等人于 1989年提出。 如：抗體庫的構(gòu)建 表達(dá)載體噬菌粒 pCANTAB 5E 噬菌體展示技術(shù)的應(yīng)用 1. 與蛋白質(zhì)相互作用的研究 有研究利用 T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)，以絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中 p38作為靶蛋白，篩選了與其有結(jié)合關(guān)系的多肽或蛋白，得到了 46個編碼蛋白的序列，在這些蛋白中有激酶、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白和離子通道相關(guān)蛋白等。 ? T7噬菌體展示文庫可以展示相當(dāng)部分表達(dá)的蛋白質(zhì)，甚至可以保持蛋白的一定構(gòu)象。
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