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正文內(nèi)容

功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(留存版)

  

【正文】 達(dá)產(chǎn)物。 蛋白質(zhì)芯片是核心部分 , 芯片上固定的介質(zhì)可以是陰離子 、 陽(yáng)離子 、 疏水性 、 親水性 、 金屬等 ,根據(jù)蛋白質(zhì)的化學(xué)特性而有選擇性地捕獲特異的蛋白質(zhì) 。 目前常用蛋白質(zhì)芯片有: 1. SELDITOFMS蛋白質(zhì)芯片 2. 抗體芯片 3. 靶蛋白質(zhì)芯片 4. 液相蛋白質(zhì)芯片 SELDITOFMS蛋白質(zhì)芯片 表面加強(qiáng)激光解吸電離 飛行時(shí)間質(zhì)譜 (surface enhanced laser desorption /ionization time of flightmass spectrometry, SELDITOFMS ) 蛋白質(zhì)芯片由3部分組成:蛋白質(zhì)芯片 、 閱讀器和分析軟件 。進(jìn)而通過親和富集法篩選表達(dá)有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體,最終獲得具有特異結(jié)合性質(zhì)的多肽 /蛋白質(zhì)。 ? 分別經(jīng)分子克隆技術(shù)在同一細(xì)胞中表達(dá)的 BD和AD多肽不會(huì)彼此間發(fā)生作用, BD和 AD分別可以同其他蛋白質(zhì) X或 Y結(jié)合形成融合蛋白 ,如果 X, Y之間可以形成蛋白 蛋白復(fù)合物 ,使 GAL4兩個(gè)結(jié)構(gòu)域重新構(gòu)成 AD和 BD成為一體 ,就可以啟動(dòng)特異基因序列的轉(zhuǎn)錄。 酵母雙雜交體系的新發(fā)展 ? 傳統(tǒng)酵母雙雜交體系的改建 根據(jù)酵母的營(yíng)養(yǎng)缺陷 ,發(fā)展了多重篩選機(jī)制 表達(dá)載體構(gòu)建的改進(jìn) 將蛋白的相互作用場(chǎng)所從核內(nèi)移至細(xì)胞膜 ? 哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交系統(tǒng) ? 三雜交系統(tǒng)的產(chǎn)生:用于研究蛋白和 RNA間的相互作用。 ? 該技術(shù)利用了酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4性質(zhì), GAL4包括兩個(gè)彼此分離但功能上必需的結(jié)構(gòu)域 ,一個(gè)是位于 N端 1174位氨基酸殘基區(qū)段的 DNA結(jié)合(DNA binding domain,DNABD),另一個(gè)是位于 C端 768881位氨基酸殘基區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(Activation domain, AD)。 ? 液相芯片體系由許多不同的小球體為主要基質(zhì),每種小球體上固定有不同的探針分子,將這些小球體懸浮于一個(gè)液相體系中,就構(gòu)成了一個(gè)液相蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)。 ? 蛋白質(zhì)芯片反應(yīng)結(jié)果
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