功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(更新版)
【正文】 作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會(huì)誤入歧途。 酵母雙雜交系統(tǒng) 應(yīng)用 它主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面 : 是否有相互作用 。 酵母雙雜交系統(tǒng) ? 酵母雙雜交技術(shù)由 Fields等人于 1989年提出。 ? T7噬菌體展示文庫可以展示相當(dāng)部分表達(dá)的蛋白質(zhì)，甚至可以保持蛋白的一定構(gòu)象。 液相蛋白質(zhì)芯片 是一種新型的、高度靈活的多元蛋白質(zhì)研究平臺，可以適用于蛋白質(zhì)組研究、臨床研究和藥物研究中的各種蛋白質(zhì)分析。 檢測結(jié)果經(jīng)過軟件分析處理后 ， 可繪制出質(zhì)譜圖 ， 顯示相關(guān)蛋白質(zhì)的分子量 、 含量等信息 。 ? 蛋白質(zhì)芯片技術(shù) ? 噬菌體展示技術(shù) ? 酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)芯片 蛋白質(zhì)芯片 是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面，形成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測。雜交反后的芯片上各個(gè)反應(yīng)點(diǎn)的熒光位置、熒光強(qiáng)弱經(jīng)過芯片掃描儀和相關(guān)軟件可以進(jìn)行分析，將熒光信號轉(zhuǎn)成數(shù)據(jù)，即可獲得有關(guān)生物信息。 芯片上排列了許多已知蛋白質(zhì)的單克隆抗體，這些單克隆抗體對應(yīng)的蛋白質(zhì)（抗原）都是細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白，涉及信號傳導(dǎo)、腫瘤、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡等廣泛的領(lǐng)域。 ? 可同時(shí)固定各種蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物分子， 可以對同一個(gè)樣品中的多個(gè)不同的分子同時(shí)進(jìn)行檢測。 ? cDNA庫是在噬菌體衣殼蛋白的基因中插入從某些組織或細(xì)胞中抽提出來的 mRNA的互補(bǔ) DNA片段，從而表達(dá)該組織或細(xì)胞的各種蛋白于噬菌體的表面。 DNABD和 AD單獨(dú)作用均不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng) ,只有當(dāng)二者在空間上充分接近并呈現(xiàn)完整的 GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性時(shí) ,方可激活 UAS下游啟動(dòng)。 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性 雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于核內(nèi) ,而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工 ,如糖基化 ,二硫鍵形成等 ,這些反應(yīng)在核內(nèi)無法
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