功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(更新版)
【正文】 作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實驗驗證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會誤入歧途。 酵母雙雜交系統(tǒng) 應(yīng)用 它主要應(yīng)用在以下幾個方面 : 是否有相互作用 。 酵母雙雜交系統(tǒng) ? 酵母雙雜交技術(shù)由 Fields等人于 1989年提出。 ? T7噬菌體展示文庫可以展示相當部分表達的蛋白質(zhì)，甚至可以保持蛋白的一定構(gòu)象。 液相蛋白質(zhì)芯片 是一種新型的、高度靈活的多元蛋白質(zhì)研究平臺，可以適用于蛋白質(zhì)組研究、臨床研究和藥物研究中的各種蛋白質(zhì)分析。 檢測結(jié)果經(jīng)過軟件分析處理后 ， 可繪制出質(zhì)譜圖 ， 顯示相關(guān)蛋白質(zhì)的分子量 、 含量等信息 。 ? 蛋白質(zhì)芯片技術(shù) ? 噬菌體展示技術(shù) ? 酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)芯片 蛋白質(zhì)芯片 是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面，形成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對生物分子的準確、快速、大信息量的檢測。雜交反后的芯片上各個反應(yīng)點的熒光位置、熒光強弱經(jīng)過芯片掃描儀和相關(guān)軟件可以進行分析，將熒光信號轉(zhuǎn)成數(shù)據(jù)，即可獲得有關(guān)生物信息。 芯片上排列了許多已知蛋白質(zhì)的單克隆抗體，這些單克隆抗體對應(yīng)的蛋白質(zhì)（抗原）都是細胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白，涉及信號傳導(dǎo)、腫瘤、細胞周期調(diào)控、細胞結(jié)構(gòu)、細胞凋亡等廣泛的領(lǐng)域。 ? 可同時固定各種蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物分子， 可以對同一個樣品中的多個不同的分子同時進行檢測。 ? cDNA庫是在噬菌體衣殼蛋白的基因中插入從某些組織或細胞中抽提出來的 mRNA的互補 DNA片段，從而表達該組織或細胞的各種蛋白于噬菌體的表面。 DNABD和 AD單獨作用均不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng) ,只有當二者在空間上充分接近并呈現(xiàn)完整的 GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性時 ,方可激活 UAS下游啟動。 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性 雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于核內(nèi) ,而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工 ,如糖基化 ,二硫鍵形成等 ,這些反應(yīng)在核內(nèi)無法
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