凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(更新版)
【正文】 柱管內(nèi)加入約 1/3柱容積的洗脫液，然后在攪拌下，將濃漿狀的凝膠連續(xù)地傾入柱中，使之自然沉降，待凝膠沉降約 2— 3cm后，打開柱的出口，調(diào)節(jié)合適的流速，使凝膠繼續(xù)沉集，待沉集的膠面上升到離柱的頂端約 5cm處時(shí)停止裝柱，關(guān)閉出水口。 葡聚糖凝膠有不同的型號，用于分離不同相對分子質(zhì)量大小的物質(zhì)。若分子大小介于上述完全排阻或完全滲入凝膠的物質(zhì)，則居二者之間從柱中流出。凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 掌握凝膠層析的基本原理。大分子物質(zhì)沿凝膠顆粒間隙隨洗脫液移動(dòng)，流程短，移動(dòng)速率快，先被洗出層析柱；而小分子物質(zhì)可通過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入顆粒內(nèi)部，然后再擴(kuò)散出來，故流程長，移動(dòng)速度慢，最后被洗出層析柱，從而使樣品中不同大小的分子彼此獲得分離。 Vo為外水體積，Mr為相對分子質(zhì)量， a和 b為常數(shù)。 ? 2. 裝柱與平衡 裝柱前須將凝膠上面過多的溶液傾出，將層析柱垂直裝好。按加樣操作，用少量（約 1ml）洗脫液沖洗管壁 2次。只要測得幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的 Ve，并以它們的相對分子質(zhì)量的對數(shù)(logMr)對 Ve作圖得一直線，再測出待測樣品的 Ve，即可從圖中確定它的相對分子質(zhì)
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