凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量-文庫吧在線文庫
【正文】 層析法也稱分子篩層析法，是利用具有一定孔徑大小的多孔凝膠作固定相的層析技術(shù)。 ? 凝膠是一種不帶電的具有三維空間的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、呈珠狀顆粒的物質(zhì)，每個顆粒的細微結(jié)構(gòu)及篩孔的直徑均勻一致，像篩子，小的分子可以進入凝膠網(wǎng)孔，而大的分子則排阻于顆粒之外。 利用 Andrews的實驗經(jīng)驗式： lgMr = a/b— Ve/bVo 式中， Ve為洗脫體積。溶脹過程中注意不要過分攪拌，以防顆粒破碎。上樣時應(yīng)盡量保持床面的穩(wěn)定。建議長期用干燥狀態(tài)保存。 思考題 ? 生化實驗中常用的凝膠有哪些種類？各有何特點？ ? 凝膠層析除用于測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量外，還有何用途？ ? 比較電泳和層析測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的差異。注意恒壓瓶內(nèi)的排氣管應(yīng)無液體，并隨著柱下口溶液的流出不斷有氣泡產(chǎn)生，則表示恒壓瓶不漏氣。上樣的體積，分析用量為柱床容積的 1— 2%；制備用量為柱床容積的20%~30%。裝柱要求連續(xù)、均勻、無氣泡、無 “ 紋路 ” 。例如 Sephardex G75的分級范圍是 300080000的球形分子
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