凝膠層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量(存儲(chǔ)版)
【正文】 hardex G75干粉，加過(guò)量的蒸餾水室溫充分溶脹一天（溶脹時(shí)間因凝膠交聯(lián)度不同而不同），或沸水浴中溶脹 3小時(shí)，這樣可大大縮短溶脹時(shí)間，而且可以殺死細(xì)菌和霉菌，并可排出凝膠內(nèi)氣泡。 ? 3. 上樣與洗脫 樣品上柱是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一，若樣品稀釋或上柱不均，會(huì)使區(qū)帶擴(kuò)散，影響層析效果。短期可保存在水相中，加入防腐劑或加熱滅菌后于低溫保存。也要防止液體流干，使凝膠混入大量氣泡，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)，導(dǎo)致分離效果變壞，不得不重新裝柱。操作過(guò)程中，層析柱內(nèi)液面不斷下降，則表示整個(gè)系統(tǒng)有漏氣之處，應(yīng)仔細(xì)檢查并加以糾正。 ? 4. 收集與鑒定 用自動(dòng)部分收集器收集流出液，每管 4ml，紫外檢測(cè)儀 280nm波長(zhǎng)處檢測(cè)，最高的一個(gè) OD值時(shí)的體積即為吸收峰的洗脫體積Ve。 將洗脫劑與恒流泵相連，恒流泵出口端與層析柱相連。在本實(shí)驗(yàn)中用于分離胰島素（ Mr為6000）和牛血清蛋白（ Mr75000）。 如果假定蛋白質(zhì)分子近于球形，同時(shí)沒(méi)有顯著的水合作用，則不同大小分子量的蛋白質(zhì)，在洗脫時(shí)峰的位置和該物質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量有直接的定量的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)原理 ? 凝膠
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