凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(文件)
【正文】 集流出液，每管 4ml，紫外檢測儀 280nm波長處檢測，最高的一個(gè) OD值時(shí)的體積即為吸收峰的洗脫體積Ve。 計(jì)算 分子量的測定和計(jì)算，一般都采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。操作過程中，層析柱內(nèi)液面不斷下降，則表示整個(gè)系統(tǒng)有漏氣之處，應(yīng)仔細(xì)檢查并加以糾正。 ? 你認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在哪里？上樣前為什么要將柱中多余液體放出？ 。也要防止液體流干，使凝膠混入大量氣泡，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)，導(dǎo)致分離效果變壞，不得不重新裝柱。 注意事項(xiàng) ? 各接頭不能漏氣，連續(xù)用的小乳膠管不要有破損，否則造成漏氣、漏液。短期可保存在水相中，加入防腐劑或加熱滅菌后于低溫保存。最后加入少量洗脫液于凝膠上，使高出床表面 3～ 5cm，旋緊上口螺絲帽，柱進(jìn)水口連通恒流泵，調(diào)好流速，以每管 3ml/10min流速開始洗脫。 ? 3. 上樣與洗脫 樣品上柱是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一，若樣品稀釋或上柱不均，會(huì)使區(qū)帶擴(kuò)散，影響層析效果。關(guān)閉出口，向柱管內(nèi)加入約 1/3柱容積的洗脫液，然后在攪拌下，將濃漿狀的凝膠連續(xù)地傾入柱中，使之自然沉降，待凝膠沉降約 2— 3cm后，打開柱的出口，調(diào)節(jié)合適的流速，使凝膠繼續(xù)沉集，待沉集的膠面上升
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