蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法(存儲(chǔ)版)
【正文】 ml凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào),各加1顆玻璃珠，在1號(hào)及2號(hào)瓶中各加樣品1mL，催化劑(K2SO4CuSO4?5H2O)200mg，濃硫酸5mL。撤掉火力，冷卻至室溫。,第十四頁，共二十五頁。再輕提玻璃塞，使一半蒸餾水慢慢流入反響室，一半留在玻璃杯中作水封。,【實(shí)驗(yàn)(sh237。 l237。,第十七頁，共二十五頁。 ② 試劑B，50mL：取2gCuSO4y224。ng)的試管中，參加BCA試劑5mL，搖勻，于37℃保溫30min，冷卻至室溫后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線1號(hào)管為對(duì)照，在595nm處比色，記錄吸光值 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 根據(jù)樣品的吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。染料與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，大約為2分鐘，結(jié)合物的顏色在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。 2.實(shí)驗(yàn)試劑 (1)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：稱取10mg牛血清白蛋白，溶于蒸餾水中并定容至100mL，制成100μg/mL的溶液。n)方法】,1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取6支枯燥潔凈的大試管，編號(hào)，按下表參加試劑。n)上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。移液管1毫升4支，5毫升2支。ngpǐn)測(cè)定,第二十五頁，共二十五頁。ng)總結(jié),【實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)】。y224。,【實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。蛋白質(zhì)含量在11000μg范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)染料復(fù)合物在595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法測(cè)定。,2.樣品測(cè)定 準(zhǔn)確吸取250μL樣品溶液于一枯燥潔凈(ji233。,第十八頁，共二十五頁。2H2O(0.16%)，4gNaOH(0.4%)，9.5gNaHCO3(0.95)，加水至1L，用NaOH或固體(g249。)生成深紫色的化合物，這種穩(wěn)定的化合物在562nm處具有強(qiáng)吸收值，并且化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。,第十六頁，共二十五頁。待樣品和對(duì)照均蒸餾完畢后，同時(shí)進(jìn)行滴定。取30％的氫氧化鈉溶液10ml放入小玻璃杯中， 輕提棒狀玻璃塞使之流入反響室(為了防止冷凝管倒吸，液體流入反響室必須緩慢)。 fǒu)變色，如不變色那么證明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。d224。y224。,【實(shí)驗(yàn)材料】 1.實(shí)驗(yàn)器材 微量凱氏定氮儀1套；50mL凱氏燒瓶4個(gè)；移液管；錐形瓶；試管；小玻璃珠 2.試驗(yàn)試劑(sh236。但是，這個(gè)反響進(jìn)行得比較緩慢，通常需要參加硫酸鉀或硫酸鈉以提高反響液的沸點(diǎn)，并參加硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反響的進(jìn)行。 2.測(cè)定未知樣品 取樣品溶液4毫升,加蒸餾水4mL混勻，在280nm下測(cè)定其光密度值。,【實(shí)驗(yàn)材料】 1.實(shí)驗(yàn)器材 試管及試管架；50毫升容量瓶2只；移液管；紫外分光光度計(jì)。,第六頁，共二十五頁。zh236。n)材料】,使用前用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定，酚酞為指示劑，以標(biāo)定該試劑的酸度，一般為2mol／L左右(由于濾液為淺黃色，滴定時(shí)濾液需稀釋100倍，以免影響滴定終點(diǎn)的觀察)?；亓魍戤?，再加150g硫酸鋰、50mL蒸餾水及數(shù)滴液體溴，開口(kāi kǒu)繼續(xù)沸騰15分鐘，以便驅(qū)除過量的溴，冷卻后定容到1000mL。ng)波長：假設(shè)蛋白質(zhì)含量高時(shí)〔25100μg〕在500nm波長處進(jìn)行測(cè)定，含量低時(shí)(525μg)在755nm波
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