蛋白質(zhì)的分離純化概要(存儲版)
【正文】 zǐ)基團(tuán)引入到交聯(lián)瓊脂糖(Speharose CL)和大孔合成凝膠(Trisacryl或Fractogel)上，那么形成一系列離子交換劑。ngku224。,層析緩沖液的選擇 選擇正確的緩沖液可獲得較好的層析效果。n)劑所帶電荷相同。 柱床體積：至少要比結(jié)合(ji233。,〔四〕柱層析技術(shù)(j236。u)分別為Na和Cl型是最穩(wěn)定形式。,血清蛋白常用離子交換(l237。,凝膠層析又稱凝膠滲透層析、排阻層析，分子篩層析等。當(dāng)溶質(zhì)通過層析柱時，溶質(zhì)分子不僅是向下運動，而且還在做無定向擴(kuò)散運動。nqu225。從數(shù)學(xué)概念上考慮，別離分辨率可以表示為：,VV2是兩種物質(zhì)的洗脫體積，可以從加樣品開始到洗脫峰的最高點為止的洗脫體積計算。,第四十九頁，共六十一頁。,第五十七頁，共六十一頁。③別離純化：包括粗分級別離和細(xì)分級別離。)所有樣品所需要的要大2—5倍。柱床體積：至少要比結(jié)合(ji233。ng)總結(jié),第一節(jié) 引言。,第五十五頁，共六十一頁。,第四十七頁，共六十一頁。ngy224。,溶質(zhì)分子在柱上移動的速度〔即被凝膠顆粒阻滯的程度〕決定于該分子在兩相間的分配常數(shù) Kd。lǜ)層析,第四十三頁，共六十一頁。ngy242。,各類離子交換劑的再生(z224。陽離子和陰離子交換劑最后(zu236。洗脫可用恒定組成的緩沖液來完成〔簡單洗脫〕也可用改變pH或鹽濃度，或二者均改變的洗脫液來完成。,第三十八頁，共六十一頁。n)過程，采用緩沖液所帶的電荷應(yīng)與離子交換(l237。②細(xì)粒子：分辨力高、交換容量大但是流速慢。oji224。,OC2H4N+(C2H5)2,第三十五頁，共六十一頁。n)的層析凝膠或離子交換劑好。ng),第三十頁，共六十一頁。 suān)、弱堿型。,可用來作為交換劑支持物的物質(zhì)種類(zhǒngl232。假設(shè)按酸堿性的強(qiáng)弱，又可分為強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、弱酸(ru242。 zǐ jiāo hu224。 zǐ jiāo hu224。,一、層析的一般(yībān)原理,如果柱頂參加32mg樣品，樣品的質(zhì)量分配系數(shù)D為1，即樣品在兩相中是等量分配。)流動相。ng)分析法、免疫化學(xué)法、N末端氨基酸分析法等。zh242。 常用的電泳方法有聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳。假設(shè)預(yù)先將有機(jī)溶劑冷卻，然后在不斷攪拌下將其逐漸參加蛋白質(zhì)溶液中，防止有機(jī)溶劑局部濃度過高，那么在很大程度上解決變性問題。 不同的蛋白質(zhì)有不同的等電點，因此通過調(diào)節(jié)溶液pH到目的蛋白的等電點，可使之沉淀而與其它蛋白質(zhì)分開(fēn kāi)，從而除去大量雜蛋白。如：,血清(xu232。n xī),向蛋白質(zhì)溶液(r243。,第十一頁，共六十一頁。qǔ),大多數(shù)蛋白質(zhì)均能溶于水、稀鹽、稀堿或稀酸溶液中，故蛋白質(zhì)的提取一般以水溶液提取為主。xiǎo)的不同，經(jīng)過不同速度的離心后，沉降于離心管的不同部位，經(jīng)屢次分步離心后，即可獲得所需組分。nd224。 su236。假設(shè)不立即進(jìn)行實驗或加工，應(yīng)冷凍保存。,第四頁，共六十一頁。 活性：要求大分子保持天然構(gòu)象狀態(tài)，有高度(gāod249。 ②工業(yè)生產(chǎn)的需要：食品、發(fā)酵、紡織、制革等工業(yè)，需要大量的高活性的酶制劑。蛋白質(zhì)是生物功能的執(zhí)行者，擔(dān)負(fù)著生物催化、物質(zhì)運輸、運動、防御、調(diào)控(di224。,第二章 蛋白質(zhì)別離純化原理(yu225。 ④基因工程的需要,第二頁，共六十一頁。而且提純步驟越多，損失越大。工業(yè)生產(chǎn)上注意選擇含量高、來源豐富(fēngf249。bāo)的破碎,別離提取某一生物大分子，首先要求生物大分子從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來，并保持原來的天然狀態(tài)，不丟生物活性。,組織細(xì)胞的破碎方法很多，不同的實驗規(guī)模，不同的實驗材料和實驗要求，使用的破碎方法和條件也不同。,三、細(xì)胞器的別離(fēnl237。qǔ),組織細(xì)胞破碎過程中，大量(d224。,第十頁，共六十一頁。 性質(zhì) 方法 分子大小 透析、超濾、密度梯度離心(l237。 鹽析作用是由于當(dāng)鹽濃度較高時，鹽離子與水分子作用，使水的活度降低，原來溶液中大局部的自由水轉(zhuǎn)變?yōu)辂}離子的水化水，從而降低蛋白質(zhì)極性基團(tuán)與水分子之間的作用，破壞蛋白質(zhì)分子外表的水化層，使蛋白聚集沉淀。i),(NH4
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