蛋白質(zhì)的分離純化(存儲(chǔ)版)
【正文】 ★ Ping pong reactions 〔doubledisplacement reactions),㈢多底物(dǐ w249。,研究(y225。)分?jǐn)?shù),★相對(duì)(xiāngdu236。ng),第二十七頁，共六十七頁。,競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制(y236。 不能通過(tōnggu242。zh236。,可逆抑制作用的動(dòng)力學(xué)特征(t232。 〔2〕抑制程度決定(ju233。) 參加非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑后，Km 雖然不變，但由于Vmax減小，所以酶促反響速度也下降了。n xiǎo),一組平行(p237。 能夠引起酶的抑制作用的化合物那么稱為抑制劑。,①、 有機(jī)磷的?；?二異丙基磷酰氟〔DFP，神經(jīng)毒氣〕和許多有機(jī)磷農(nóng)藥。tǒng)。,⑵專一性不可逆抑制劑 此類抑制劑僅僅和某一種酶的活性部位的必需基團(tuán) 反響。xū)基團(tuán)進(jìn)行不可逆結(jié) 合 P376 圖 926 β 氯代DAla抑制丙氨酸消旋酶的機(jī)制,第五十二頁，共六十七頁。ol236。,第五十七頁，共六十七頁。,第五十九頁，共六十七頁。,1. pH影響酶活力的因素 ①影響酶蛋白構(gòu)象，過酸或過堿會(huì)使酶變性。ng s249。,最適pH與底物種類、濃度及緩沖液成分有關(guān)。 ★ 激活劑的濃度要適中，過高往往有抑制作用，1~50mM,六、 激活劑對(duì)酶反響(fǎny236。ir243?！?〕了解生物體的代謝途徑，進(jìn)行人為調(diào)控或代謝控制發(fā)酵?！趯?shí)踐上，可以為治療人類和畜禽傳染病而設(shè)計(jì)療效更高的抗菌抗病毒藥物。,THANK YOU,第六十六頁，共六十七頁。, 無機(jī)離子的激活作用 〔1〕金屬(jīnshǔ)離子：K+ 、Na+、Mg2+ 、Zn2+、Fe 2+ 、Ca2+ 〔2〕陰離子：Cl、Br 、PO43 〔3〕氫離子 ★不同的離子激活不同的酶。)到達(dá)最大時(shí)的介質(zhì)pH。 ③影響酶和底物分子中另外一些基團(tuán)解離，這些基團(tuán)的離子化狀態(tài)影響酶的專一性及活性中心構(gòu)象。 ②凍干粉可在在低溫冰箱中較長(zhǎng)期保存。,四、 溫度對(duì)酶反響(fǎny236。j236。,蝶呤 對(duì)氨基(ānjī)苯甲酸 Glu,二氫葉酸合成酶,二氫葉酸,四氫葉酸(y232。 專一性程度取決于它與活性中心及活性中心外的的Ks之比 P376 圖925 胰蛋白酶的底物及其Ks型不可逆抑制劑,㈤一些(yīxiē)重要的抑制劑,第五十一頁，共六十七頁。h233。,第四十八頁，共六十七頁。,㈤一些(yīxiē)重要的抑制劑,1. 不可逆抑制劑： ⑴ 非專一性不可逆抑制劑 與酶的活性中心以及(yǐj237。,第四十五頁，共六十七頁。)決定于[I]和Ki ，與底物的Km和[S]無關(guān)： 抑制程度與[I]成正比 在一定[I] 下， Ki越大，抑制作用越小,第四十三頁，共六十七頁。,2.非競(jìng)爭(zhēng)性抑制(y236。)的增大而增大,第三十九頁，共六十七頁。,㈣可逆抑制作用的動(dòng)力學(xué),第三十六頁，共六十七頁。,酶只有(zhǐyǒu)在與底物結(jié)合后，才能與抑制劑結(jié)合。) 〔noncompetitive inhibition〕,底物和抑制劑可以同時(shí)與酶結(jié)合，但是，中間的三元復(fù)合物ESI不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，因此，酶的活性降低。 可以通過增加底物濃度而解除此種抑制。,㈡抑制作用的類型(l232。)的兩種表示方法,★相對(duì)活力(hu243。,變性作用(denaturation)： 抑制作用(inhibiton)：使酶活力下降或喪失但并不引起酶蛋白變性 變性劑沒有(m233。,其他(q237。guān)地比較不同的酶或同一種酶催化不同底物的催化效率。,第十六頁，共六十七頁。,米氏常數(shù)(ch225。)， Vmax為最大反響速度,當(dāng)反響速度等于最大速度一半(yīb224。,第十一頁，共六十七頁。ng)速度的各種因素，包括底物濃度、酶濃度、pH、溫度、激活劑與抑制劑等。 酶的純化倍數(shù)： 酶的回收率： 100%,第七頁，共六十七頁。 B：l ml 2%可溶性starch ，在1h內(nèi)液化所需的enzyme量。s1〕 1 Kat =60 106 IU,第四頁，共六十七頁。ng)與
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