蛋白質(zhì)的定量測定方法-資料下載頁
2025-10-26 05:31本頁面
【正文】 液于一枯燥潔凈(ji233。j236。ng)的試管中，參加BCA試劑5mL，搖勻，于37℃保溫30min，冷卻至室溫后，以標準曲線1號管為對照，在595nm處比色，記錄吸光值 【實驗結(jié)果】 根據(jù)樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。,第二十頁，共二十五頁。,五、考馬斯亮藍染料(rǎnli224。o)結(jié)合比色法,【實驗?zāi)康摹?掌握用考馬斯亮藍染料結(jié)合比色法測定蛋白質(zhì)含量的原理和操作方法。 【實驗原理】 考馬斯亮藍G250是一種染料，在游離狀態(tài)下呈紅色，最大吸收峰在465nm。當它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變成深藍色，最大吸收峰變?yōu)?95nm。蛋白質(zhì)含量在11000μg范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)染料復(fù)合物在595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法測定。 蛋白質(zhì)染料復(fù)合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白質(zhì)測定的靈敏度，最低檢出量為1μg蛋白。染料與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，大約為2分鐘，結(jié)合物的顏色在1小時內(nèi)穩(wěn)定。所以本法操作簡便，快速(ku224。i s249。)，靈敏度高，穩(wěn)定性好，是一種測定蛋白質(zhì)含量的常用方法。,第二十一頁，共二十五頁。,【實驗(sh237。y224。n)材料】,1.實驗器材 分光光度計；試管；移液管；容量瓶。 2.實驗試劑 (1)標準蛋白質(zhì)溶液：稱取10mg牛血清白蛋白，溶于蒸餾水中并定容至100mL，制成100μg/mL的溶液。 (2)考馬斯亮藍G250 試劑：稱取100mg考馬斯亮藍G250，溶于50mL 95％乙醇(yǐ chn)中，參加85%(m/v)的磷酸100mL，最后用蒸餾水定容到1000mL。此溶液可在常溫下放置一個月。 (3)樣品溶液：配制約50μg/mL的牛血清白蛋白溶液作為樣品。,第二十二頁，共二十五頁。,【實驗(sh237。y224。n)方法】,1.繪制標準曲線 取6支枯燥潔凈的大試管，編號，按下表參加試劑。 上述試劑加完后，混勻，室溫靜置2min，以第1管為對照(du236。zh224。o)，在595nm處比色，讀取各管吸光值，以牛血清白蛋白含量為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制標準曲線。,第二十三頁，共二十五頁。,【實驗(sh237。y224。n)結(jié)果】,根據(jù)樣品的吸光值從標準曲線(qūxi224。n)上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。,2.樣品測定 準確吸取1.0mL樣品溶液于一支枯燥潔凈的試管中，參加(jiār249。)考馬斯亮藍G250試劑5mL，搖勻，室溫靜置2min，以標準曲線1號管為對照，在595nm處比色，記錄吸光值。,第二十四頁，共二十五頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),【實驗預(yù)習(xí)】。一、Folin酚試劑法(Lowry法)。移液管1毫升4支，5毫升2支。在3號及4號瓶中各加1mL蒸餾水和與2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。將一個含有硼酸和指示劑的錐形瓶放在冷凝器下方，使冷凝器下端浸沒在液體內(nèi)。四、二喹啉甲酸法(BCA法)。蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時將Cu2+復(fù)原成Cu+。2.樣品(y224。ngpǐn)測定,第二十五頁，共二十五頁
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