蛋白質(zhì)的分離純化概要-資料下載頁(yè)
2024-11-04 05:31本頁(yè)面
【正文】 劑帶上希望的離子。陽(yáng)離子和陰離子交換劑最后(zu236。h242。u)分別為Na和Cl型是最穩(wěn)定形式。,洗脫速度：太快或太慢都會(huì)降低柱的分辨率。 分級(jí)物收集量：關(guān)系到能否充分代表層析柱的分辨率。一般(yībān)總洗脫體積在500—2000ml時(shí)，每管收集5—10ml,〔五〕離子交換劑的處理(chǔlǐ)和再生,離子交換劑價(jià)格較貴，用后再經(jīng)過再生處理，可反復(fù)屢次使用。處理時(shí)防止用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿長(zhǎng)時(shí)間浸泡，以防載體的糖鏈結(jié)構(gòu)遭水解破壞。,第四十頁(yè)，共六十一頁(yè)。,各類離子交換劑的再生(z224。ishēng)條件,第四十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。,血清蛋白常用離子交換(l237。 zǐ jiāo hu224。n)層析別離。IgG可用QAE—Sephadex A—50或DEAE—Sephadex A—50別離。現(xiàn)在臨床上有重要用途的許多血清蛋白，如白蛋白，factor IX復(fù)合物和專一性免疫球蛋白已用離子交換層析大規(guī)模生產(chǎn)。,〔六〕離子交換層系的應(yīng)用(y236。ngy242。ng)實(shí)例,第四十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。,凝膠層析又稱凝膠滲透層析、排阻層析，分子篩層析等。它主要用于別離分子大小不同的生物大分子及測(cè)定(c232。d236。ng)其分子量。凝膠層析設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，每次層析后無(wú)需再生處理，因此，在生化研究中應(yīng)用及其廣泛。,三、凝膠過濾(gu242。lǜ)層析,第四十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。,凝膠層析載體是多孔凝膠。當(dāng)溶質(zhì)通過層析柱時(shí)，溶質(zhì)分子不僅是向下運(yùn)動(dòng)，而且還在做無(wú)定向擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。分子直徑比凝膠孔徑大的分子，不能進(jìn)入凝膠顆粒的微孔(wēi kǒnɡ)里，只能經(jīng)過凝膠顆粒之間的孔隙。這樣的分子是隨溶劑一起移動(dòng)的，因而最先流出柱外；而分子直徑比凝膠孔徑小的分子，那么能夠自由進(jìn)入凝膠顆粒的微孔(wēi kǒnɡ)之中，即進(jìn)入凝膠相內(nèi)。小分子向下移動(dòng)的速度必然要落后于大分子。凝膠顆粒是固定相，洗脫液是流動(dòng)相。,(一) 根本原理,第四十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。,溶質(zhì)分子在柱上移動(dòng)的速度〔即被凝膠顆粒阻滯的程度〕決定于該分子在兩相間的分配常數(shù) Kd。Kd由下式計(jì)算： Kd=(VeVo)/Vp 式中Ve為某種物質(zhì)從柱內(nèi)完全(w225。nqu225。n)洗脫出來(lái)時(shí)洗脫液的體積；Vo為膠粒之間空隙的總?cè)莘e，也稱外水體積；Vp為膠粒內(nèi)部孔隙的總?cè)莘e，稱內(nèi)水體積。假設(shè)分子大，完全不能進(jìn)入膠粒微孔，那么最先流出柱，此時(shí)Kd=0；假設(shè)分子小，能完全進(jìn)入膠粒微孔，那么最 后流出柱，此時(shí)Kd=1對(duì)中等大小的分子，只能局部進(jìn)入膠粒微孔，所以Kd值在0—1之間。不同溶質(zhì)是按Kd由小到大的順序流出柱。,第四十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。,凝膠過濾法的分辨率是凝膠層析中的另一個(gè)重要(zh242。ngy224。o)的特征性常數(shù)。從數(shù)學(xué)概念上考慮，別離分辨率可以表示為：,VV2是兩種物質(zhì)的洗脫體積，可以從加樣品開始到洗脫峰的最高點(diǎn)為止的洗脫體積計(jì)算。 WW2分別為兩個(gè)物質(zhì)的洗脫峰的寬度，可以由通過峰邊拐點(diǎn)的兩條切線與基線交點(diǎn)間的距離來(lái)計(jì)算。兩個(gè)物質(zhì)要完全別離(fēnl237。)，ρ必須大于或等于1。影響分辨率的因素很多，如凝膠粒度、上樣量、流速、溫度、凝膠類型及層析柱的形狀等。,ρ=,2〔V2V1),W1+W2,第四十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第四十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第四十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第四十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十六頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十八頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第六十頁(yè)，共六十一頁(yè)。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第一節(jié) 引言?；钚裕阂蟠蠓肿颖３痔烊粯?gòu)象狀態(tài)，有高度的生物活性。③別離純化：包括粗分級(jí)別離和細(xì)分級(jí)別離。其中前兩個(gè)階段為別離純化的前處理。一般動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿器破碎或用超聲波處理破碎。常用的電泳方法有聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳。特征：有一個(gè)固定相和一個(gè)流動(dòng)相。二乙基氨基乙基。柱床體積：至少要比結(jié)合(ji233。h233。)所有樣品所需要的要大2—5倍。W1+W2,第六十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。,
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