蛋白質(zhì)的通性、純化與表征-資料下載頁
2025-05-01 18:07本頁面
【正文】 膠中建立 pH梯度，當?shù)鞍踪|(zhì)移動到其等電點的 pH時，凈電荷為零，在電場中不再移動而聚集。 ?IEF分離蛋白質(zhì)靠 分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng) ，可分離 pI僅差，分辨率高。 （ 2）等電聚焦電泳 (isoelectric focusing, IEF) 6）親和層析 lgMr ＝ a﹣ bVe 凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)分子量 依靠分子篩效應(yīng)分離蛋白質(zhì)，適應(yīng)球狀蛋白的測定 蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的測定 ?SDSPAGE： 在 聚丙烯酰胺凝膠中加入十二烷基硫酸鈉（ SDS）和巰基乙醇，以此凝膠為支持物的電泳 稱為 SDSPAGE。 ?SDS和巰基乙醇存在的情況下，蛋白質(zhì)在電場上移動的速度完全取決于蛋白質(zhì)分子量的大小，與蛋白質(zhì)本身電荷的多少和形狀無關(guān)，即只有 分子篩效應(yīng) 。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定分子量 沉降分析法測定相對分子量 沉降速度：與蛋白質(zhì)的大小、密度、形狀以及溶劑的密度和粘度相關(guān)。 Mr= ———— RTs D(1vρ) 沉降系數(shù) S用高速離心機測定 Ultracentrifugation 蛋白質(zhì)的含量測定與純度鑒定 蛋白質(zhì)含量測定 總蛋白含量分析 ： 凱氏定氮法 、 Folin酚法 （ Lowry法 ） 、 雙縮脲法 、 考馬斯亮藍法 、 紫外吸收法 。 特定蛋白組分的含量分析 ： 酶和激素等：酶活性或激素活性表示 （ 比活性 ） 其它蛋白：抗原抗體反應(yīng) (western blot) 純度鑒定（均一性） 基本手段 ： 電泳分析：單條帶 。 選用手段 ： 沉降分析 、 溶解度分析 、 結(jié)晶分析 （ 能結(jié)晶的一般比較純 ， 具有活性 ） 本章重點知識 ?蛋白質(zhì)溶液的酸堿性和等電點的大小主要與什么有關(guān)？ ?蛋白質(zhì)膠體能保持穩(wěn)定的主要原因。 5種蛋白質(zhì)沉淀方法的主要原理（主要破壞蛋白質(zhì)膠體的那種穩(wěn)定因素）。 ?凝膠過濾分離蛋白質(zhì)的原理。蛋白分子量大小、分配系數(shù)和洗脫體積三者之間的關(guān)系。 ?等電點沉淀法、 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)和 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE）分離蛋白質(zhì)的原理。
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