蛋白質(zhì)的分離純化ppt課件-資料下載頁
2025-05-07 13:48本頁面
【正文】 sephadex 聚焦層析 等電點和離子交換作用 多緩沖交換劑（與帶有多種電 荷基團的配體相偶聯(lián)的 sepharose 6B） 37 吸附層析 （ absorption chromatography） 原理 ： 以吸附劑作為固定相 ， 選擇適當(dāng)?shù)娜軇┳髁鲃酉?。 由于各種物質(zhì)的極性不同 ， 被吸附劑吸附的程度和在流動相中的溶解度不同 。 層析時， 當(dāng)流動相從固定相上流過時 ， 各組分也就不同程度地被解吸 ， 然后又再被吸附 、 再解吸再吸附， 從而以不同速度隨流動相向前移動 。 載體 ： 硅膠 氧化鋁 羥基磷灰石 38 分子篩（凝膠）層析 （ gelfiltration chromatography） 原理 （ 見后 ） 基質(zhì) 葡聚糖凝膠 （ sephadex） 瓊脂糖凝膠 （ sepharose） 應(yīng)用 測定分子量 脫鹽和濃縮 分離提純生物大分子 除去熱原物質(zhì) 39 40 凝膠過濾 （ 分子篩 ） 根據(jù)不同分子量選擇不同凝膠 a. Sephadex: 交聯(lián)葡聚糖 G10， 15， 25， 50，75， 100， 150， 200；得水值 X 10 b. Sepharose：瓊脂糖凝膠 BioGel A c. BioGel P：聚丙烯酰胺凝膠分子篩 d. Sephacryl：用 N， N亞甲雙丙烯酰胺交聯(lián)的葡聚糖凝膠 41 用于凝膠過濾的凝膠有多種，基本結(jié)構(gòu)為內(nèi)部帶有孔洞的球狀顆粒。裝入玻璃管或不銹鋼管內(nèi)，叫做凝膠層析柱。待分離的混合物加在層析柱的上端，當(dāng)混合物向下移動時，大分子不進入凝膠的內(nèi)部孔洞，從凝膠顆粒之間移動；而小分子不但在凝膠顆粒之間移動，還會進入凝膠顆粒的內(nèi)部孔洞，這樣，大分子先從層析柱底端流出，小分子晚流出。達到分離的目的。 42 a. 分離蛋白質(zhì) b. 脫鹽 c. 蛋白質(zhì)分子量的測定 應(yīng) 用 43 44 離子交換層析 離子交換介質(zhì)是一些表面帶有電荷的顆粒，可以結(jié)合帶有異性電荷的離子。蛋白質(zhì)或核酸的分子，一般都帶有電荷，不同的蛋白質(zhì)或核酸，攜帶的電荷可能有差異，根據(jù)這些差異，進行蛋白質(zhì)或核酸的分離。 45 :離子交換劑與反離子結(jié)合 ：樣品與反離子進行交換 4. 解吸附階段：用梯度緩沖溶液洗脫，先洗下弱吸附物質(zhì)，后洗下強吸附物質(zhì) ：用原始平衡液進行充分洗滌， 即可重復(fù)使用。 46 1 2 3 4 5 原始緩沖溶液的反離子 47 疏水層析 疏水層析的介質(zhì)表面有疏水基團，可與蛋白質(zhì)分子的疏水基團結(jié)合，不同的蛋白質(zhì)分子結(jié)合的力量不同，也可實現(xiàn)混合物分離的目的。
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