蛋白質(zhì)分離技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-17 09:11本頁(yè)面
【正文】 5種類型，即 2％， 4％， 6%，8％和 10％。 瓊脂糖凝膠 型號(hào) 2022/2/11 Biochemistry Experiments 40 在洗脫過程中，所有組分一般都可被洗脫下來，所以裝好柱后，可反復(fù)使用，無需特殊的再生處理。但多次使用后，凝膠顆粒可能逐漸沉積壓緊，流速變慢。這時(shí)只需將凝膠自柱內(nèi)倒出，重新填裝?；蚴褂梅礇_法，使凝膠松散沖起，然后自然沉降，形成新的柱床。 凝膠過濾 再生和保養(yǎng) 2022/2/11 Biochemistry Experiments 41 生物大分子的純化 分子量測(cè)定 脫鹽及去除小分子雜質(zhì) 去熱源物質(zhì) 溶液的濃縮 凝膠過濾 應(yīng)用 2022/2/11 Biochemistry Experiments 42 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 原理 血紅蛋白 （ Hb， 分子量 64480左右 ） 與二硝基苯 — 核黃素 （ 分子量 376） 混合物 ， 由于分子大小不同 ， 通過 Sephadex G— 50層析受阻滯程度有差異 ， 從而達(dá)到分離 。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 43 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 器材 層析柱（ 25ml） 等 [試劑 ] ： VB Hb G50 2022/2/11 Biochemistry Experiments 44 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 操作 1. 凝膠的制備與裝柱： 向?qū)游鲋鶅?nèi)加蒸餾水趕走在層析柱的死體積和接口處的氣泡，在蒸餾水高度約占體積的1/3時(shí)，關(guān)閉下端出口，自頂部緩緩加入已處理好的 Sephadex G50懸液，待底部凝膠沉積 1~2cm時(shí)，打開出口，凝膠加至凝膠沉積離層析柱口約 3cm后， 用 3～ 5倍體積洗脫緩沖液平衡。 裝柱注意點(diǎn)： 不得有氣泡和分層； 凝膠表面應(yīng)平整； 柱床體積穩(wěn)定； 不能讓凝膠表面露出水面 。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 45 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 操作 ： 將出口打開，使表面的蒸餾水流出，直至恰好與表面相平（不可使床面干掉），關(guān)緊出口，用滴管將樣品緩緩地加到床表面，注意盡量不要使平整的床表面攪動(dòng)，然后打開出口，讓樣品進(jìn)入床內(nèi)，直至床面恰好露出，用洗脫液洗滌 。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 46 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) 操作 ： 洗脫時(shí)要控制流速為 4m1/3min。 觀察 Hb和核黃素 （ B2)的分離 。 ： 用蒸餾水洗滌凝膠層析柱 10分鐘即可 。 取下層析柱 ， 將上下口打開 ， 從上口處用吸耳球一吹膠即可從下口流出 ， 凝膠可以滅菌保存 ， 干燥保存 ， 和防腐劑保存 。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 47 Hb的制備 抗凝血 1ml 離心 5分鐘 3000rpm 上清 沉淀 %NaCl 離心 5分鐘 3000rpm 沉淀 上清 重復(fù)兩次 5倍體積 蒸餾水 上清 2022/2/11 Biochemistry Experiments 48 三離心機(jī)的使用： ①按“ power” 鍵打開離心機(jī)電源開關(guān)； ②配平并平衡放置離心管； ③設(shè)置離心參數(shù)后蓋上離心機(jī) ，按“ start” 鍵； ④使用完畢，關(guān)閉離心機(jī)開關(guān)，并切斷電源； 注意事項(xiàng)： ①離心管必須平衡，才能啟動(dòng)離心機(jī)； ②發(fā)現(xiàn)有不平衡或異常情況，按“ stop” 鍵立即停止離心； ③如離心機(jī)在低溫下離心，使用完畢后需擦干，打開蓋子， 以防止結(jié)冰，損壞離心機(jī)。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 49 實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求 : ? 根據(jù)下列要求結(jié)合本實(shí)驗(yàn)自行設(shè)計(jì) : ⑴ 實(shí)驗(yàn)題目 。 ⑵ 實(shí)驗(yàn)原理； ⑶ 儀器、材料和試劑； ⑷ 簡(jiǎn)要實(shí)驗(yàn)步驟； ⑸ 結(jié)果與分析（含數(shù)理?yè)?jù)處理
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