蛋白質組研究技術ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 06:01本頁面
【正文】 2. 一維 IEF電泳－質譜分離鑒定蛋白質 ? 與質譜方法相比， SDSPAGE測定蛋白質相對分子 質量誤差大，分辨率差， 更重要的是， 很難獲得翻譯后修飾蛋白質相對分子質量變化的準確信息 ? 精確測定全細胞蛋白質的相對分子質量 ? 一維 IEF電泳－質譜： 采用 IPG膠條進行等電聚焦電泳， MALDITOFMS對膠條 進行表面直接分析 。將一向 IEF電泳與準確、靈敏、高分辨率的相對分子質量測定技術相結合，誤差 ％ ％ 第三節(jié) 高通量蛋白質鑒定技術 一、生物質譜技術 1. 質譜技術：一百多年的歷程，早期的質譜技術分析對象主要是小分子化合物，質量范圍在幾千以下 2. 20世紀 80年代末期，產(chǎn)生了兩項軟電離質譜技術－ ESI和 MALDITOF，具有高靈敏度（ pmol）和高質量檢測范圍（幾萬到幾十萬 Da） 3. ESI ：采用四級桿質量飛行器，所構成的儀器成為電噴霧（四級桿）質譜儀；其特點之一是可以和液相色譜、毛細管電泳等高效分離手段聯(lián)用，因而可以實現(xiàn) 復雜化合物分離與鑒定的聯(lián)機操作 4. MALDITOF ： 常用飛行時間質量分析器，所構成的儀器成為基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜儀； 特點是對鹽和填加物的耐受能力強，且操作簡單，測定速度快，易于實現(xiàn)高通量，譜峰與樣品成分的質量有一一對應關系，圖譜容易解析 5. 離子阱 （ ion trap） 質譜儀和傅立葉變換離子回旋共振 （ fourier transform ion cyclotron resonance, FTICR）質譜 6. 電噴霧－四極桿－飛行時間質譜儀 ： 大大提高了儀器的分辨率和靈敏度 7. 帶有串連質譜功能的 MALDITOF質譜儀 ：引進了源后裂解或碰撞誘導解離裝置， 可進行肽序列測定 二、 2DE膠上蛋白質識別與鑒定技術 2DE電泳 已知蛋白 蛋白質膠上原位酶切 MALDITOFMS分析 肽質量指紋譜數(shù)據(jù)庫檢索 蛋白質鑒定 ESIMSMS分析 蛋白質鑒定 肽序列標簽數(shù)據(jù)庫檢索 蛋白質從頭測序 新蛋白 已知蛋白 易于實現(xiàn)高通量 特異性高，可實現(xiàn)分離、 鑒定一體化操作 2DE膠上蛋白質鑒定流程圖 50－ 60％ 20－ 30％ ? MALDITOFMS：優(yōu)點是易于實現(xiàn)高通量，適合于膠上蛋白質的高通量、大規(guī)模識別與鑒定；但不適合分析蛋白質混合樣品或新蛋白，且準確度要求較高 ?ESIMSMS：優(yōu)點是特異性高，且適合混合樣品的蛋白識別與鑒定；與液相色譜相連可實現(xiàn)分離、鑒定一體化操作；但分析速度慢且操作復雜 三、生物質譜新技術 1. 帶 MALDI源的四極桿－飛行時間質譜儀 (MALDI QqTOF) ? 將 MALDI離子源與四極桿－飛行時間－串連質譜儀連接， 從而實現(xiàn)了樣品靶上的同一個樣品在同一臺質譜儀上的肽質量指紋譜分析與肽序列標簽分析同時進行。 ? 已經(jīng)成功用于 2DE膠上蛋白質的鑒定 2. MALDITOFTOF質譜儀 ? 該儀器將 MALDITOF肽質量指紋譜分析的高通量與碰撞誘導解離（ collisioninduced dissociation, CID）獲得的豐富碎片信息相結合，對同一樣品相進行肽質量指紋譜分析，接著進行串連質譜分析， 使得在微量樣品水平上對蛋白質的鑒定在數(shù)秒內完成 四、結語 蛋白質組學的研究開辟了功能基因組學研究的新領域。一方面，蛋白質組研究為探索生生命的奧妙提供了嶄新的思路和手段；另一方面，蛋白質組研究期待著新的技術方法的突破。隨著基因組學與生物信息學技術的發(fā)展，政府投資與商業(yè)投入的加大，蛋白質組學研究必將在 21世紀取得突破性的進展。
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