蛋白質(zhì)分離純化步驟-資料下載頁(yè)
2025-11-10 04:00本頁(yè)面
【正文】 料的預(yù)處理及細(xì)胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時(shí)，首先要把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài)，不喪失活性。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細(xì)胞破碎。常用的破碎組織細(xì)胞的方法有：1. 機(jī)械破碎法 這種方法是利用機(jī)械力的剪切作用，使細(xì)胞破碎。常用設(shè)備有，高速組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽等。2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細(xì)胞溶脹而破碎。3. 反復(fù)凍融法 生物組織經(jīng)凍結(jié)后，細(xì)胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細(xì)胞脹破。這種方法簡(jiǎn)單方便，但要注意那些對(duì)溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細(xì)胞膜上所受張力不均而使細(xì)胞破碎。5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細(xì)胞等?！ ?二) 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX100等），使膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中，應(yīng)注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性?！ 。ㄈ┑鞍踪|(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法： 1. 等電點(diǎn)沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離?！ ?. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì)，并能再度溶解而不變性。 3. 有機(jī)溶劑沉淀法 中性有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低，進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái)，因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì)。此外，有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層，促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性，使用該法時(shí)，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機(jī)溶劑濃度。（四）樣品的進(jìn)一步分離純化 用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過(guò)濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 內(nèi)容總結(jié)（1）一、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細(xì)胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起，而且每種類型的細(xì)胞都含有成千上萬(wàn)種不同的蛋白質(zhì)（2）由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性，使用該法時(shí)，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機(jī)溶劑濃度（3）由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性，使用該法時(shí)，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機(jī)溶劑濃度
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