蛋白質(zhì)的分離純化概要-全文預(yù)覽
【正文】 容量大，通透性好。早期用于別離氨基酸、小肽和其它小分子物質(zhì)的離子交換樹脂的支持物是聚苯乙烯類。,離子交換基團(tuán)(jī tu225。 強(qiáng)酸和強(qiáng)堿型交換劑能在較廣泛的pH范圍內(nèi)〔pH2—12〕完全解離。,第二十六頁，共六十一頁。,帶電蛋白質(zhì)分子(fēnzǐ)與交換劑的結(jié)合是可逆的。當(dāng)pH〉pI，分子帶負(fù)電，可結(jié)合陰離子交換劑；當(dāng)pHpI，分子帶正電，可結(jié)合陽離子交換劑。 離子交換劑是通過化學(xué)反響將解離基團(tuán)引入到惰性支持物上形成的。,第二十四頁，共六十一頁。ngh233。,分配系數(shù): k=Cs/Cm ,物質(zhì)在固定相與(xiāngyǔ)流動(dòng)相濃度之比。 根據(jù)兩相的狀態(tài)，層析法可分為：氣相層析和液相層析；按層析原理可分為：吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠過濾層析和親和層析等。特征：有一個(gè)(yī ɡ232。同樣純的蛋白質(zhì)在離心場中，應(yīng)以單一的沉降速度移動(dòng)。 蛋白質(zhì)和酶制品純度鑒定通常采用的方法有：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法、等電聚焦電泳法、超速離心沉降(ch233。 總活力=活力單位/ml酶液總體積〔ml〕 比活力=總活力單位數(shù)/總蛋白〔氮〕mg 純化倍數(shù)=每次比活力/第一次比活力 回收率〔產(chǎn)率〕=〔每次總活力/第一次總活力〕100%,第二十頁，共六十一頁。zh242。,第十九頁，共六十一頁。進(jìn)一步提純，通常使用高分辨率的柱層析及電泳方法。o)的有機(jī)溶劑濃度不同，因此可利用不同濃度的有機(jī)溶劑別離不同的蛋白質(zhì)。,第十七頁，共六十一頁。,〔3〕有機(jī)溶劑法,與水互溶的極性有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、丙酮等能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低(ji224。n),蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其溶解度與其凈電荷數(shù)量有關(guān)，隨溶液pH變化而變化。nb225。,不同的蛋白質(zhì)分子，由于其分子外表(biǎomi224。)中參加大量的中性鹽[〔NH4)2SO4，Na2SO4]，使蛋白質(zhì)脫去水化層而聚集沉淀，這種現(xiàn)象稱為鹽析。,粗分級別離,第十三頁，共六十一頁。)純化,蛋白質(zhì)別離純化的方法很多，主要是根據(jù)蛋白分子之間特異性的差異，如分子大小，溶解度，電荷等建立起來的。 ch 對于一些(yīxiē)和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性較多的蛋白質(zhì)，不溶于水、稀鹽、稀堿、稀酸，常在提取液中參加適量的有機(jī)溶劑，如乙醇、丙酮、異丙醇、正丁醇等。,第九頁，共六十一頁。,四、提取(t237。 細(xì)胞器的別離一般采用差速離心法，即將破碎后的細(xì)胞在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中進(jìn)行離心，常用的介質(zhì)有蔗糖、甘露醇、檸檬酸、聚乙二醇等。,第七頁，共六十一頁。 細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較困難，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅(jiān)韌。,第六頁，共六十一頁。)。,二、細(xì)胞(x236。 實(shí)驗(yàn)材料選定后，常常需要進(jìn)行預(yù)處理，如動(dòng)物材料需要除去一些與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的結(jié)締組織、脂肪組織；植物種子需要除殼；微生物需要將菌體與發(fā)酵液分開。)純化的前處理,一、材料的選擇與預(yù)處理 選擇材料主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?su236。 收率：希望收率越高越好，但在別離純化過程中總有不少損失。)的要求,純度：主要取決于研究的目的和應(yīng)用上的要求。 ③醫(yī)療的需要：如用豬胰島素治療糖尿病。n hu224。nɡ)及記憶、識別等多種生理功能。第一節(jié) 引言(yǐny225。o k242。,一、別離純化(ch如用淀粉酶制造葡萄糖、麥芽糖、糊精以及糖漿等。n hu224。)的生物活性。,三、別離純化的一般(yībān)程序,蛋白質(zhì)分子的別離純化一般可分為以下幾個(gè)階段： ①材料的選擇和預(yù)處理 ②破碎(p242。,第二節(jié) 蛋白質(zhì)別離(fēnl237?？蒲羞x材那么無需考慮上述問題，只要能到達(dá)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募纯伞?第五頁，共六十一頁。 su236。)。 植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁，一般常用與石英砂和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ㄆ扑榛蛴美w維素酶處理也能到達(dá)目的。ng)、與石英砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理〔以分解肽聚糖〕。 如果要?jiǎng)e離制備分布在這些細(xì)胞器中的生物大分子，為了防止其他細(xì)胞組分中的物質(zhì)對制備物的干擾或污染，還需先將細(xì)胞器別離出來，然后在某一細(xì)胞器中別離某一物質(zhì)。,第八頁，共六十一頁。ng)的胞內(nèi)酶及細(xì)胞內(nèi)含物被釋放出來，必須立即將其置于一定條件下和溶劑
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