凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量(完整版)
【正文】 ?？傊?，各種不同相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分子，最終由于它們被排阻和擴散的程度不同，在凝膠柱中所經(jīng)過的路程和時間也不同，從而彼此可以分離開來。 ? 學(xué)習利用凝膠層析法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的實驗技能。當含有分子大小不一的蛋白質(zhì)混合物樣品加到用此類凝膠顆粒裝填而成的層析柱上時，這些物質(zhì)即隨洗脫液的流動而發(fā)生移動。它是自加樣品開始到該組分的洗脫峰（峰頂）出現(xiàn)時所流出的體積。待溶脹平衡后用傾瀉法除去不易沉下的細小顆粒，最后凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準備裝柱。先打開柱的出口，待柱中洗脫液流至距床表面 1～ 2mm時，關(guān)閉出口，用滴管將 1ml樣品慢慢地加至柱床表面，應(yīng)避免將床面凝膠沖起，打開出口并開始計算流出體積，當樣品滲入床中接近床表面 1mm時關(guān)閉出口。 計算 分子量的測定和計算，一般都采用標準曲線法。 ? 你認為本實驗的關(guān)鍵在哪里？上樣前為什么要將柱中多余液體放出？ 。 注意事項 ? 各接頭不能漏氣，連續(xù)用的小乳膠管不要有破損，否則造成漏氣、漏液。最后加入少量洗脫液于凝膠上，使高出床表面 3～ 5cm，旋緊上口螺絲帽，柱進水口連通恒流泵，調(diào)好流速，以每管 3ml/10min流速開始洗脫。關(guān)閉出口，向
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1