蛋白質(zhì)含量測定方法匯總(完整版)
【正文】 7支，編號，按下表操作：試劑(ml)\管號空白管12345測定管蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（10g/L）生理鹽水待測樣品雙縮脲試劑相當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)（g/L）01020304050[器材]然后加水至1000ml。測定范圍為1～10mg蛋白質(zhì)。按上表分別向各支試管內(nèi)加入各種試劑，充分混勻，5min后在595nm波長處以0號管調(diào)零,測定各管吸光度值（A）。[操作步驟]1．一、染料法[實驗原理]在酸性溶液中染料考馬斯亮藍G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，此時考馬斯亮藍G250顏色從紅色變?yōu)樗{色，吸收高峰從460nm移至595nm。實驗七利用這個原理可以測定蛋白質(zhì)含量。以吸光度值為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。干擾這一測定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。棕色瓶中避光保存。1．試管：15150mm混勻，37℃水浴20分鐘，冷卻至室溫，在分光光度計波長540nm處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度值。3．本法各種蛋白質(zhì)的顯色程度基本相同，重復(fù)性好，幾乎不受溫度影響，唯一缺點是靈敏度較低。同時蛋白質(zhì)肽鍵發(fā)生烯醇化反應(yīng)（反應(yīng)式二）能使鉬離子在pH10時螯合在肽結(jié)構(gòu)中，形成復(fù)合物，從而使電子轉(zhuǎn)移到混合酸的顯色劑上，大大增加了酚試劑對蛋白質(zhì)的敏感性。NaOH溶液100ml中。3．樣品：，置于50ml容量瓶中，%NaCl溶液稀釋至刻度處，混勻，為待測血清樣品?；靹颍覝胤胖?0min后，以0管調(diào)零點，在波長650nm比色，分別讀取各管吸光度值。（3）營養(yǎng)不良或長期消耗性疾病，如嚴重結(jié)核或長期消耗性疾病。、靈敏度高，缺點是試劑只與蛋白質(zhì)中半胱氨酸、色氨酸等起反應(yīng)，因此可因各種蛋白質(zhì)中含這幾種氨基酸的量不同使顯色強度稍有不同。此外，蛋白質(zhì)溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。[試劑器材]1．蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/ml）： 準(zhǔn)確稱量經(jīng)微量凱氏定氮法校正的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)配制。[注意事項]，因此要注意保持待測蛋白質(zhì)溶液的pH值與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液一致。如同時測定260nm的光吸收，通過計算可以消除其對蛋白質(zhì)測定的影響。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取8支干凈試管，編號，按下表加入試劑。2. 未知濃度蛋白質(zhì)溶液：用酪蛋白配制，～。思考題??？其基本原理是什么? ，應(yīng)如何校正? 加畢，用紫外分光光度計測A280nm，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)作圖。操作步驟 在紫外分光光度計上，將未知的蛋白質(zhì)溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對照，測得280nm和260nm兩種波長的吸光度（A280nm及A260nm）。測定液必須澄清，以免造成結(jié)果誤差。[操作步驟]：取8支試管，按下表編號并加入試劑：試劑（
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