20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細胞儀分析技術(shù)應(yīng)用-資料下載頁
2024-11-11 18:38本頁面
【正文】 供額外的激光束。 缺點：對于敏感性來說，空氣激發(fā)不那么敏感。,第四十二頁，共五十二頁。,補償計算(j236。 su224。n)的量化精確調(diào)整,購買補償微球（compbeads），標(biāo)記實驗中所需要涉及的抗體，孵育后作為(zu242。w233。i)單陽補償管，進行上樣通過圈門調(diào)整微球群中位數(shù)，修正所有補償。建立良好的補償矩陣，這樣的補償計算更標(biāo)準。,第四十三頁，共五十二頁。,接收工具(gōngj249。)的模板標(biāo)準化,因為實驗的需求不同，所以單細胞分選到不同接收器中，這其中包括24孔板，96孔板，72孔板乃至384孔板等，在每個機器上調(diào)整相應(yīng)模板，使其固定為標(biāo)準化的模板，每次使用直接調(diào)用，不需要重復(fù)進行調(diào)整。這將極大提高(t237。 gāo)分選效率和精確性。,第四十四頁，共五十二頁。,單細胞的培養(yǎng)(p233。iyǎng)鑒定,將分好的單細胞至于相應(yīng)的培養(yǎng)基中進行14天培養(yǎng)，培養(yǎng)后對每板細胞存活比例(bǐl236。)進行統(tǒng)計，然后對存活的各孔細胞向各系進行分化趨向的統(tǒng)計。,1 細胞(x236。bāo) / 孔 IMDM + 10%FBS + SCF 100ng/mL + TPO 50ng/mL + Flt3L 100ng/mL,14天,檢測nmEM四系分化：人（CD19，CD33），鼠（Gr1，Mac1，Ter119，CD41）,第四十五頁，共五十二頁。,技術(shù)(j236。sh249。)路線,第四十六頁，共五十二頁。,第四十七頁，共五十二頁。,CD34PE CD38FITC CD34+ CD38 細胞 1/ PE Isotype。 FITCIsotype : 設(shè)置陰性對照門, 去除抗體非特異性吸附(xīf249。)的影響 2/ CD34PE 。 FITCIsotype : 單陽管對照, 設(shè)置補償 3/CD38FITC 。 PE Isotype : 單陽管對照, 設(shè)置補償 4/ CD34PE 。 CD38FITC : 檢測分選管,第四十八頁，共五十二頁。,適當(dāng)?shù)闹苽浞绞?處理紅細胞 實體(sh237。tǐ)組織來源標(biāo)本用機械法 溫度25~37℃，pH7.0~7.2,四、流式細胞免疫學(xué)技術(shù)(j236。sh249。)的質(zhì)量控制,（一）單細胞懸液制備(zh236。b232。i)的質(zhì)控,第四十九頁，共五十二頁。,溫度 pH 染料(rǎnli224。o)濃度 固定劑,（二）免疫熒光染色(rǎns232。)的質(zhì)控,第五十頁，共五十二頁。,培養(yǎng)基及血清的選擇 溫度 離心(l237。xīn)速度 無菌操作,（三）分選后細胞(x236。bāo)的培養(yǎng),第五十一頁，共五十二頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),實驗室流式細胞儀單細胞分選技術(shù)。參數(shù)：FS,SS,FL。等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞相對或絕對數(shù)，即“等高”。（三）三參數(shù)直方圖。A、B、C均為任意門。防止耦聯(lián)染料(rǎnli224。o)降解（光照/固定/升溫等）造成的干擾。APCCy7/PECy7。PE.PC.APC。因此組合抗體應(yīng)用濃度應(yīng)比單獨抗體使用濃度高。溫度25~37℃，pH7.0~7.2。（三）分選后細胞的培養(yǎng),第五十二頁，共五十二頁。,
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