20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀原理和一般用法-資料下載頁
2024-11-15 05:37本頁面
【正文】 算，但實(shí)際的原理是按細(xì)胞團(tuán)的位置來定的，也就是純粹按照計(jì)算得出的，比如上圖的R4細(xì)胞團(tuán)，它在X軸上的位置是0.3到1之間，在Y軸的位置是2到6之間，這團(tuán)細(xì)胞平均值在FL1,FL2中的分部坐標(biāo)為0.68,3.9。因此斜率為0.68/3.9=17.43，因此FL1的補(bǔ)償后平均值為FL117.43%FL2=0.6817.43%*3.9=0.0023，它的右側(cè)區(qū)域應(yīng)該在117.43%*3.9=0.32，左側(cè)區(qū)域應(yīng)該在0.317.43%*3.9=3.79，因?yàn)槭秦?fù)數(shù)，就自動(dòng)歸為0.1了，如果(rguǒ)是完全按照計(jì)算來做補(bǔ)償，圖形將很大一部分跑出了雙參數(shù)圖，也就是說無法得到我們滿意的圖形，但由于我們勾選了“Random Bias”，所有的圖形將重新被分配，就像上圖的Q1門中的顯示一樣。，我們通常按照細(xì)胞聚集區(qū)的中心點(diǎn)來計(jì)算，但實(shí)際的原理是按細(xì)胞團(tuán)的平均值來計(jì)算。,第四十三頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),FL1未染色(rǎns232。),FL2未染色(rǎns232。),FL1染色,FL2未染色,FL1FITC CD3,補(bǔ)償后,平均值 = ~2.0,FL1染色,FL2未染色,第四十四頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),第四十五頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),上機(jī)檢測(cè)(jiǎn c232。),樣本染色及溶血過程處理完后應(yīng)立即上機(jī)檢測(cè) 打開流式細(xì)胞儀 (選擇進(jìn)行質(zhì)控程序） 打開應(yīng)用軟件并選擇相應(yīng)(xiāngyīng)的方案或新建方案 加載或重新調(diào)節(jié)各參數(shù) 上樣檢測(cè),流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十六頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),技巧一：定位目標(biāo)(m249。biāo)細(xì)胞群體,尋找細(xì)胞群：如標(biāo)本為外周血白細(xì)胞，在FSC/SSC散點(diǎn)圖中信號(hào)最強(qiáng)的為粒細(xì)胞，依次為單核、淋巴、紅細(xì)胞碎片。如尋找淋巴細(xì)胞，可首先調(diào)低FSC/SSC電壓(di224。nyā)定位粒細(xì)胞后逐步調(diào)高電壓(di224。nyā)依次尋找各細(xì)胞群。 如標(biāo)本中無明顯特征細(xì)胞群，可使用已建淋巴細(xì)胞檢測(cè)方案根據(jù)相對(duì)位置定位目標(biāo)細(xì)胞群,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十七頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),技巧(j236。qiǎo)二：陰性或陽性對(duì)照,陰性對(duì)照作用：調(diào)節(jié)PMT電壓；設(shè)立陰、陽性界線 使用抗體相應(yīng)同型熒光免疫球蛋白作為陰性對(duì)照，注對(duì)照及抗體需出自同一廠家（檢測(cè)一過性樣本中的某些指標(biāo)(zhǐbiāo)） 使用對(duì)照組樣本作陰性對(duì)照（與其他實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組含意相同，但此時(shí)仍需使陰性對(duì)照初始化儀器） 對(duì)與非抗體染色，如各類核酸染料或探針：PI、ANNEXINV。使用空白標(biāo)本作為陰性對(duì)照，或設(shè)立陽性對(duì)照。,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十八頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),技巧三：檢測(cè)(jiǎn c232。)指標(biāo),檢測(cè)前要清楚地知道：除陽性百分比指標(biāo)外，還有熒光強(qiáng)度指標(biāo)。后者往往比前者更有意義 檢測(cè)時(shí)，靈活(l237。nɡ hu243。)應(yīng)用放大模式：線性或?qū)?shù)（如指標(biāo)相差不大，使用線性放大，如：SSC、FSC；一般熒光參數(shù)使用對(duì)數(shù)放大） 靈活運(yùn)用設(shè)門（Region和Gate）的邏輯關(guān)系及顏色示蹤功能，可使檢測(cè)結(jié)果更為明了 合理選擇不同的熒光素標(biāo)記試劑，以最少的投入獲取最多的信息,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十九頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),例：檢測(cè)正常(zh232。ngch225。ng)成人外周血淋巴細(xì)胞CD4/CD8/CD3,第五十頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。n fā)經(jīng)驗(yàn),復(fù)雜(f249。z225。)方案分析,了解流式儀胞儀各參數(shù)(cānsh249。)的意義 熟悉設(shè)門操作 開擴(kuò)思路，靈活設(shè)計(jì)各種檢測(cè)方案,第五十一頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),http://www.partec.com http://www.partec.de,我 們 的 網(wǎng) 站,第五十二頁，共五十四頁。,,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),謝謝(xi232。 xie)大家！,第五十三頁，共五十四頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),Partec Excellence in Flow Cytometry。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測(cè)量區(qū)。表示數(shù)量累計(jì)，相同強(qiáng)度(qi225。ngd249。)的光信號(hào)在同一橫坐標(biāo)點(diǎn)（通道）內(nèi)向Y軸方向累計(jì)。算術(shù)定義的平均值=（V1+V2+V3。打開應(yīng)用軟件并選擇相應(yīng)的方案或新建方案。使用對(duì)照組樣本作陰性對(duì)照（與其他實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組含意相同，但此時(shí)仍需使陰性對(duì)照初始化儀器）。使用空白標(biāo)本作為陰性對(duì)照，或設(shè)立陽性對(duì)照。謝謝大家,第五十四頁，共五十四頁
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