【正文】 237。ngch233。ng)細胞——QHS 溶血空斑實驗 PFC——液相小室法 固相瓊脂法 ELISPOT檢測特異性抗體形成細胞功能,第九十五頁，共一百一十五頁。,溶血(r243。nɡ xu232。)空斑試驗,又稱為PFC（Plaque forming cell）測定技術，是一種體外檢測(jiǎn c232。)單個抗體形成細胞（漿細胞）的方法。 分為直接溶血空斑試驗和間接溶血空斑試驗 ； 直接溶血空斑試驗：測定產(chǎn)生 IgM 型抗體的細胞，只加細胞和補體 ； 間接溶血空斑試驗：檢測產(chǎn)生 IgG 或 IgA的細胞，加靶細胞、顯斑劑、補體； 顯斑劑：抗各類 Ig 高純度的抗血清,第九十六頁，共一百一十五頁。,原理(yu225。nlǐ),將經(jīng)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞與一定量的綿羊紅細胞（靶細胞）混合，在補體參與下，使抗體形成細胞周圍(zhōuw233。i)結合了抗體分子的羊紅細胞溶解形成肉眼可見的溶血空斑。,第九十七頁，共一百一十五頁。,溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術等因素(yīn s249。)對體液免疫功能的影響。 評價免疫治療或免疫重建后機體產(chǎn)生抗體的能力。,第九十八頁，共一百一十五頁。,B細胞抗體(k224。ngtǐ)形成功能的檢測 ——酶聯(lián)免疫斑點法,第九十九頁，共一百一十五頁。,該方法既可檢測抗體分泌細胞(x236。bāo)，又可檢測抗體分泌量。 優(yōu)點： 穩(wěn)定、特異、抗原用量少； 可同時檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌，并可定量； 可檢測組織切片中分泌抗體的單個細胞。,第一百頁，共一百一十五頁。,(4)體內(nèi)(tǐ n232。i)實驗,體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原(k224。ngyu225。n)有白喉類毒素、破傷風類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。 將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)B細胞的功能。,第一百零一頁，共一百一十五頁。,染色(rǎns232。)計數(shù),離心(l237。xīn)取上清 測LDH或AKP,離心取沉淀 測活細胞(x236。bāo)熒光,測發(fā)光強度,測CPM值,形態(tài)法 酶釋法 熒光法 同位素法 化學發(fā)光法,NK細胞活性測定,靶細胞溶解,常用靶細胞: K562細胞株,第一百零二頁，共一百一十五頁。,（二）吞噬細胞功能(gōngn233。ng)檢測,吞噬細胞的吞噬活動大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用(zu242。y242。ng)三個階段，據(jù)此建立相應的檢測方法 中性粒細胞功能檢測技術 巨噬細胞功能檢測技術,第一百零三頁，共一百一十五頁。,1.中性(zhōngx236。ng)粒細胞的功能檢測,細胞趨化功能的檢測(jiǎn c232。) 吞噬和殺菌功能的檢測,第一百零四頁，共一百一十五頁。,(1) 細胞(x236。bāo)運動功能——趨化功能檢測,原理(yu225。nlǐ)：,第一百零五頁，共一百一十五頁。,方法(fāngfǎ)：,瓊脂糖平板(p237。ngbǎn)法,濾膜滲透法（Boyden 小室法）,第一百零六頁，共一百一十五頁。,(2)吞噬和殺菌功能(gōngn233。ng)測定,顯微鏡檢查法：,第一百零七頁，共一百一十五頁。,NBT還原(hu225。n yu225。n)試驗,硝基藍四氮唑，又稱四唑氮藍(nitroblue tetrazolium, NBT)，是一種水溶性的淡黃色活性染料，可被中性粒細胞的酶還原為非水溶性的藍黑色甲月替(Formazan)顆粒,沉淀于胞漿內(nèi)； 細菌、真菌和寄生蟲感染時，中性白細胞還原NBT的能力增高； 病毒性感染或非感染性疾病則不增高； NBT還原試驗作為診斷全身性感染的一種輔助方法，并作為判定嗜中性白細胞殺菌功能的指標，以診斷吞噬(tūnsh236。)功能缺陷癥。,第一百零八頁，共一百一十五頁。,巨噬細胞功能(gōngn233。ng)檢測,炭粒廓清試驗： 正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷(p224。ndu224。n)巨噬細胞的功能。,第一百零九頁，共一百一十五頁。,（2）吞噬(tūnsh236。)功能檢測,巨噬細胞對顆粒性抗原物質(zhì)(w249。zh236。)具有很強的吞噬功能，常用雞紅細胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母細胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細胞。,第一百一十頁，共一百一十五頁。,（3）巨噬細胞溶酶體酶的測定(c232。d236。ng),酸性磷酸酶的測定 硝酸鉛法 偶氮法 非特異性酯酶的測定 常用(ch225。nɡ y242。nɡ)α萘醋酸法,第一百一十一頁，共一百一十五頁。,（4）細胞毒作用(zu242。y242。ng)測定,用IFNγ激活小鼠巨噬細胞，觀察其對125IUdR標記(biāoj236。)的DBA/2小鼠肥大細胞瘤P815的殺傷活性。,第一百一十二頁，共一百一十五頁。,（三）臨床(l237。n chu225。nɡ)應用,反映機體免疫功能狀態(tài)。 腫瘤、免疫缺陷病等疾病的診斷和疾病預后監(jiān)測。 組織器官移植后對受者的細胞免疫學功能監(jiān)測則有利于排斥反應的早期發(fā)現(xiàn)，以便及時(j237。sh237。)采取有效措施。,第一百一十三頁，共一百一十五頁。,thank you,第一百一十四頁，共一百一十五頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結,細胞因子及免疫細胞功能檢測方法簡介。mRNAcDNAPCR。Ct值=17（第17個循環(huán)時，熒光信號強度達到域值）。結果判定——融解曲線。（3）qPCR結果分析—— 相對定量解析。優(yōu)點：分析簡單，實驗(sh237。y224。n)優(yōu)化相對簡單。結論：JUN處理后表達水平是處理前的5.3倍。待測品單位數(shù)=S/A標準品單位。未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細胞的形態(tài)特征。微量溶血分光光度法測定抗體形成細胞——QHS。溶血空斑實驗(sh237。y224。n) PFC——液相小室法,第一百一十五頁，共一百一十五頁。