流式細胞術的樣品制備-資料下載頁
2025-05-10 07:14本頁面
【正文】 附了大量的單核細胞 ,因為單核細胞具有短時培養(yǎng)期內貼附快的特 點 ,而其他細胞沒有這個特性 ,所以利用這一特性進行短時培養(yǎng)可獲得較純的單核細胞。 ,用%胰 酶消化 10－ 15分鐘 ,室溫下 ,并不斷搖震 ,以促使細胞脫落下 ,單核細胞的粘附力很強 ,用酶消化往往獲得細胞數少 ,目前亦采用機械的方法 ,用一橡皮刷 ,伸入培養(yǎng)瓶在瓶壁上輕擦 ,將細胞刮取下 ,但切勿用力過大 ,造成細胞損傷過多 。 5. 脫落下來的細胞移入離心管 , 離心沉淀1500prm,5分鐘 ,再以生理鹽水漂洗 2－ 3 次 ,每次離心 800prm,2分鐘 ,以去除碎片雜質 。 ,以 丫啶 橙染色 ,置熒光顯微鏡下觀察形態(tài)和純度 。 70%乙醇固定 ,置 04℃ 冰箱保存?zhèn)錂z 。 三、脫落細胞單細胞懸液的制備 在臨床實際工作中 ， 可收集到大量自然脫落的細胞 ， 這些細胞標本經過簡單的處理 ， 就可得到較好的單分散細胞懸液 ， 所以是流式細胞術檢測的天然樣品 ， 下面介紹幾種常見的脫落細胞樣品制備方法。 ㈠ 宮頸脫落細胞懸液 的制備 ,以海棉輕拭宮頸表面 ,將海棉中吸附的脫落細胞洗脫到 20ml生理鹽水中 。 ,以 1500prm離心沉淀 ,用生理鹽水洗滌 2次 ,每次 5分鐘 ,棄上清后加入 70%乙醇 3ml固定備檢 。 ㈡ 食管 脫落細胞懸液的制備 10ml生理鹽水中 ,以1500prm離心沉淀 ,再用生理鹽水洗滌 2次 ,離心 500800prm12分鐘 ,棄上清。 1X106/ml,可進行標記染色上機 ,如不馬上檢測可用 70% 的冰乙醇固定保存。 ， 可用 %胃蛋白酶 ()在 37℃ 水浴箱中消化 510分鐘 ， 振蕩分散為單細胞懸液 。 ㈢ 胸腹水 脫落細胞的制備 200300ml， 加入抗凝劑 (肝素或 枸櫞 酸 鈉 )5ml，放入容器中置 4℃ 冰箱靜置 612小時 ， 棄上清 。 1020ml， 吸入試管內 ， 以生理鹽水洗三次 ， 以1500prm離心沉淀 5分鐘 。 枸櫞 酸緩沖液 5ml， 在室溫下放置 20分鐘。 300目篩網過濾后 ， 以 PBS洗 去 枸櫞 酸緩沖液 ， 離心沉淀去上清 ， 加入 70%乙醇固定備檢 。 ㈣ 內鏡 刷檢 樣品單細胞懸液制備 10ml鹽水中洗脫 ， 收集懸液進入試管 ,以 1500prm離心沉淀 ， 再以生理鹽水漂洗 23次 ， 每次500800prm離心沉淀 2分鐘 ， 棄上清 。 300目篩網過濾 ， 去除細胞 團 塊 。 %冷乙醇固定 ， 置于冰箱備檢 。 ㈤ 沖洗 液 樣品單細胞懸液制備 300500ml生理鹽水沖洗胃或膀 胱 ， 沖洗一定時間后 ，吸出沖洗液放入容器中 ， 于冰箱內置 612小時 。 2040ml， 離心沉淀 ， 并以生理鹽水洗兩次 ，
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