20xx年醫(yī)學專題—流式細胞儀的原理-資料下載頁
2024-11-11 18:42本頁面
【正文】 細胞膜通透性的變化(Hoechest 33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI） Caspases激活(Caspase3 ) 線粒體跨膜電位降低 (Rhodamine123） 膜磷脂酰絲氨酸外化(Annexin VFITC/PI) Ca2+ 濃度升高 (Fluo3） DNA斷裂(du224。n li232。)及含量的變化 (TUNEL 和 PI）,第四十五頁，共五十頁。,AnnexinV 和 PI 雙 染 protocol,細胞用冷PBS洗滌二次并在恰當(qi224。d224。ng)的染色緩沖液（binding buffer）中以1 x 106 細胞/mL的濃度重懸 吸取100ul的細胞(1 x 105)至試管中。 加進適量的熒光標記的annexinV試劑和PI。 混勻后避光室溫下孵育15分鐘。（必須在室溫下進行） 孵育后加進400ul染色緩沖液，立即上流式細胞儀分析。,第四十六頁，共五十頁。,AnnexinV和PI雙染的特點(t232。diǎn)和注意事項,檢測特點：簡便，快速，準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。 注意事項： 1.細胞制備（如貼壁細胞）和儲存時細胞膜的破損會導致磷脂酰絲氨酸(PS)跨膜分布的改變，造成假陽性。 2.染色(rǎns232。)后立即上機檢測。,第四十七頁，共五十頁。,Q3: 正常細胞(x236。bāo)； Q4：早期凋亡細胞； Q2：晚期凋亡細胞； Q1：壞死細胞。,第四十八頁，共五十頁。,謝謝(xi232。 xie)大家,對比流式細胞儀是一種(yī zhǒnɡ)特殊的顯微鏡,第四十九頁，共五十頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),流式細胞術(shù)的原理及應(yīng)用。用計算機系統(tǒng)對流動的單細胞懸液中單個細胞的多個參數(shù)信號進行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測速度與統(tǒng)計分析精確性。參數(shù)：FS,SS,FL。FL：反映顆粒(kēl236。)被染上的熒光數(shù)量多少以及熒光種類。D2：CD4+/CD3+。D3：CD4 /CD3。（1）淋巴細胞亞群檢測： CD3,CD4,CD8,CD16+56,CD19。AnnexinV和PI雙染的特點和注意事項,第五十頁，共五
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