第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-資料下載頁
2024-10-17 12:02本頁面
【導(dǎo)讀】細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，信號對細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。測量并可分類收集的高技術(shù)。采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)。利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，保證檢。測的靈敏度和特異性；用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對流動的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)。由樣本和鞘液組成。待測細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞的懸液熒光染料標(biāo)記的。位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。胞等粒子的表面屬性，信號強(qiáng)弱與細(xì)胞體積大小成正比。發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。光信號區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。選擇不同的單抗及染料就可同時(shí)測定一個(gè)細(xì)胞上的。進(jìn)一步培養(yǎng)和研究時(shí)進(jìn)行的。胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。
【正文】 ? 絕對計(jì)數(shù)校準(zhǔn) : 保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。 Flowcheck Flowset Flowcount （三）儀器操作的質(zhì)控 ? 同型對照：即免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，選用相同源性的 未標(biāo)記單抗 作為對照調(diào)整和設(shè)置電壓，以保證特異性。 ? 全程質(zhì)量控制：與待測標(biāo)本一起標(biāo)記和檢測，結(jié)果達(dá)靶值，提示本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。 （四）免疫檢測的質(zhì)控 流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 第四節(jié) 在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 T淋巴細(xì)胞及其亞群分析 Th(CD3+CD4+CD8T)。 Tc(CD3+CD4CD8+T) B淋巴細(xì)胞及其亞群分析 B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生 IgM型自身抗體 , 參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān) B2(CD19+CD5):受外來抗原刺激 , 產(chǎn)生高親和性特異性抗體 NK細(xì)胞分析 NK(CD3CD16+CD56+) 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 ? 細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn) (死細(xì)胞與活細(xì)胞比例 ) ? 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型 ?對淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型 ?用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變 CD4+Th細(xì)胞、 CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示對化療藥物耐藥 四、腫瘤耐藥基因分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 HLAB27可出現(xiàn)在 58%～ 97%的強(qiáng)直性脊椎炎 (As) 患者 六、自身免疫病相關(guān) HLA抗原分析 FCM作為一個(gè)強(qiáng)大的技術(shù)平臺，已應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前移植免疫中的 FCM應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)的交叉配型（ Flow cytometry crossmatching, FCXM）和群體反應(yīng)性抗體（ Panel reactive antibody, PRA）檢測。 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 1. 流式細(xì)胞儀的分析檢測原理是什么？ 2. 流式細(xì)胞儀分析中前向散射光、側(cè)向散射光和熒光的檢測意義。 3. 何謂熒光補(bǔ)償？何謂“液相芯片”技術(shù)？ 4. 細(xì)胞分選的基本原理。 5. FCM分析中有哪些數(shù)據(jù)顯示方式，如何解讀結(jié)果及其設(shè)門分析的意義？ 6. 如何進(jìn)行 FCM分析檢測樣品的制備？ 7. 流式細(xì)胞分析前如何驗(yàn)證儀器工作狀態(tài)，采用何種校正物？ 8. 流式細(xì)胞免疫分析的質(zhì)量控制包括哪些方面？ 9. 流式細(xì)胞術(shù)有哪些臨床應(yīng)用價(jià)值？ 10. 流式細(xì)胞儀分析中常見的熒光素有那些？他們的特性如何？ 小 結(jié) ?流式細(xì)胞術(shù)（ FCM）是在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實(shí)現(xiàn)對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。 ?FCM分析中前向散射光反映顆粒的大??；側(cè)向散射光反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度；熒光反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少，根據(jù)其標(biāo)記的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表達(dá)情況。 ?同型對照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，可使熒光標(biāo)記單抗的信號保持其特異性。 ?對各項(xiàng)工作環(huán)節(jié)和儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證 FCM分析中各項(xiàng)檢測數(shù)據(jù)和指標(biāo)可靠性的關(guān)鍵。
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