第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用(存儲(chǔ)版)
【正文】 +):產(chǎn)生 IgM型自身抗體 , 參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān) B2(CD19+CD5):受外來(lái)抗原刺激 , 產(chǎn)生高親和性特異性抗體 NK細(xì)胞分析 NK(CD3CD16+CD56+) 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 ? 細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn) (死細(xì)胞與活細(xì)胞比例 ) ? 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測(cè)定 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型 ?對(duì)淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型 ?用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變 CD4+Th細(xì)胞、 CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示對(duì)化療藥物耐藥 四、腫瘤耐藥基因分析 五、 AIDS病檢測(cè)中的應(yīng)用 HLAB27可出現(xiàn)在 58%～ 97%的強(qiáng)直性脊椎炎 (As) 患者 六、自身免疫病相關(guān) HLA抗原分析 FCM作為一個(gè)強(qiáng)大的技術(shù)平臺(tái)，已應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。因檢測(cè)速度極快，所以又有 “ 液相芯片 ” 之稱 。 ? 等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。 ? 分選得率： 從一群體細(xì)胞懸液中分辨出目的細(xì)胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。 ? 每種熒光染料會(huì)產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的熒光和顏色，通過(guò)波長(zhǎng)選擇通透性濾片，可將不同波長(zhǎng)的散射光和熒光信號(hào)區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。 二、散射光的測(cè)定 前向散射光 （ forward scatter, FS） ： 激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以相對(duì)軸較小角度 (176。第十七章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用 第一節(jié) 概述 一、工作原理 二、散射光的測(cè)定 三、熒光測(cè)量 四、細(xì)胞分選原理 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 一、參數(shù) 二、數(shù)據(jù)顯示方式 三、設(shè)門分析技術(shù) 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測(cè)樣品制備 二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色 三、免疫膠乳顆粒的應(yīng)用 四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用 一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 二、淋巴細(xì)胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型 四、腫瘤耐藥相關(guān)蛋白分析 五、 AIDS病檢測(cè)中的應(yīng)用 六、自身免疫性疾病相關(guān) HLA抗原分析 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 小結(jié) 流式細(xì)胞術(shù) (flow cytometry, FCM)是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 立體角方向散射的光線信號(hào)，它的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān)，主要分為 前向散射光 和 側(cè)向散射光 。 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 光散射測(cè)量最有效用途： 從非均一群體中鑒別出某些亞群 ? 熒光信號(hào)由被檢細(xì)胞上標(biāo)記的特異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)不同。與純度成反比。 ? 曲線層次越高 (越里面的線 ) 所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。 能量傳遞復(fù)合染料 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 紅色熒光 花青苷 5 藻紅蛋白 能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制 ?熒光染料與細(xì)胞成分的四種結(jié)合方式 結(jié)構(gòu)親和式 嵌入結(jié)合 共價(jià)鍵結(jié)合 熒光標(biāo)記抗體特異性結(jié)合
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