【導讀】本課程介紹「表面抗原流式分析」有關之基礎工作原理。如希望進一步了解流式細胞技術。如需要免疫熒光染色方法，請至本公司網(wǎng)站下載。FL1PMT熒光光譜峰值落在綠色范圍。儀器前方面板的右下方有三個流速控制鍵、及三個功能控制鍵。色；黃色時表示儀器不正常，請檢查是否失壓。STANDBY：無樣品或暖機時之正常位置，此時鞘液停止流動，雷射功率。入樣品管，持續(xù)一定時間后，以鞘液回注滿流動室。裝八分滿鞘液筒，儀器可以運行大約3. 筒上裝有液面感應器，鞘液用完時，儀器軟件上會有顯示。上有金屬環(huán)扣，保證鞘液筒密閉。注意廢液可能有潛在的生物傳染性。動，將液體從外管吸入廢液筒內(nèi)。

　　

【正文】 狀態(tài)： 顯示儀器運行模式 Not Ready：激光器正在預熱、鞘液桶空、廢液桶滿。 Ready：樣本管放置在進樣區(qū)，且支撐臂位于中位，樣本管加壓，儀器在 RUN狀態(tài)。 Standby：儀器在 Standby 狀態(tài)、或儀器在 Run 狀態(tài)而無樣本管在進樣區(qū)上、或支撐架位于側(cè)位、 或樣本管未完全加壓。 Standby時儀器的雷射電源降低。 常見故障排除 程序 樣品試管上不去 ? 誤用不適合的試管。（請用 BD Falcon 352052） ? 試管支持架需調(diào)整。旋轉(zhuǎn)調(diào)整試管支持架（順時鐘向下、逆時鐘向上）。 ? Bal Seal 磨損。（汰換 Bal seal） 儀器處于 N0T READY 狀況 檢查以下情況： ? 鞘液筒中的鞘液是否用完。 ? 廢液筒中的廢液是否已裝滿。 ? 開機需要 5分鐘時間預熱。 ? 鞘液筒的液面檢測器連接是否松動、或未連接。 儀器處于 STANDBY 狀況（儀器失壓） 如果儀器未加壓，上樣管放好后，雖然控制面板處于 RUN模式，但儀器仍未能達到READY狀況，此時儀器仍處于 STANDBY狀況。這可能是由于鞘液筒蓋漏氣、壓力閥未加壓，樣本管不能被加壓等原因造成的壓力問題。此時，樣本不能良好地進入流動室，無法檢測。 FACS101 Handbook 23 – 此時，檢查以下情況： ? 壓力閥未加壓。 ? 鞘液筒是否漏氣（蓋緊鞘液筒蓋）。 ? 樣本管是否有破損。 ? 上樣針上的 Bal seal是否己磨損。 ? 鞘液筒上的藍色接頭是否連接好。 儀器訊號噪 聲過高 鞘液過濾器中有氣泡，儀器記錄了氣泡產(chǎn)生的信號，造成了噪聲數(shù)據(jù)的干擾。氣泡還可以改變樣本流，造成檢測結(jié)果不理想；此時，儀器需要做 PRIME，排除液路中的氣泡干擾。如果鞘液筒吸干了，應該重新裝滿鞘液，然后先取下樣品管進行 510次 PRIME，再換上 3ml dH2O上樣管 HI RUN 30分鐘，待鞘液流中的氣泡排除之后，再進行樣本測定。 計算機屏幕上見不到細胞顯示 檢查以下情況： ? 如果儀器一直處于 STANDBY狀態(tài)，則檢查 System Status。 ? 如果 STATUS窗日顯示 READY，則檢查樣本管中細胞濃度是否夠，上樣前是否混勻了。 ? 檢查實驗的 Instrument Settings是否正確。 ? 檢查閾值是否設置過高，導致無法檢測目標細胞群。 ? 檢查 CELLQuest軟件 Cytometer目錄下的 Status窗口，是否己被更新。如果未更新，說明儀器與計算機之間的通訊發(fā)生了故障，此時，應關閉計算機和 FACSCalibur，重新打開儀器，繼續(xù)實驗。 ? PRIME儀器液流，去除流動室中可能存在的氣泡。若流動室中存在氣泡，可能使樣本流的位置偏離激光束，導致無細胞信號。 加樣針有鞘液反流 檢查以下情況： ? 檢查上樣針外管是否安好，可以將外管旋下，向上推動，重新擰緊。 ? 更換上樣針上部的 O型膠環(huán)。 ? 檢查液流保存系統(tǒng)的真空幫浦是否工作。如果樣本管支撐架位于旁位時，聽不到真空幫浦的工作聲音，可能是真空幫浦停了，關閉 FACSCalibur，再啟動；移開支撐架時，如果馬達仍然不動，請致電 BD客戶服務部門尋求幫助。 FACS101 Handbook 24 – 實驗文件 1： 2 Color ACQ FACS101 Handbook 25 – 實驗文件 2： 2 Color ANA FACS101 Handbook 26 – 表一、常用熒光染劑 測量參數(shù) 熒光染劑 吸光波長 (nm) 熒光波長 (nm) 標 示抗體用染劑 Fluorescein, FITC 490 520 PhycoerythrinR, PE 495 578 Peridininchlorophyll, PerCP 490 677 CyChrome 495 670 PETexas Red 495 620 PECyanine 5 495 670 核酸含量分析 Ethidium Bromide 510 (+ds DNA) 595 Propidium Iodide,PI 536 (+ds DNA) 623 Acridine Orange 480 (+ DNA) 44070 (+ RNA) 520 650 Thiazole Orange 509 (+ RNA) 533 Pyronine Y 560562 (+ds RNA) 497 (+ss RNA) 565574 563 細胞 Viability Propidium Iodide,PI 536 623 YOPRO1 480 515 Acridine Orange 480 520 7AAD 488 670 細胞膜電位 DiOC6 (3) 485 510 Mitochondrial 膜電位 Rhodamine 123 485 546 細胞內(nèi) pH值 BCECFAM 488 Ratio 520/620 SNARF1AM 514 Ratio 587/640 細胞內(nèi)鈣濃度 Fluo4AM 488 528 Calcium Green1 488 530 Fura Red 488 660 H2O2 sensitive Dihydrorhodamine 123 505 534 DCFHDA 505 535 O2 radical sensitive Hydroethidine 505 600 Esterase sensitive Fluorescein DA 495 525 FACS101 Handbook 27 – 表二、典型的儀器設定 Single Color Two Color Three Color FITC PE FITC/ PE FITC/ PE/ PerCP Threshold FSC FSC FSC FSC Value 52 52 52 52 FSC Voltage E00 (Lin) E00 (Lin) E00 (Lin) E00 (Lin) SSC Voltage 350 (Lin) 350 (Lin) 350 (Lin) 350 (Lin) FL1 Voltage 600 (Log) 600 (Log) 600 (Log) FL2 Voltage 540 (Log) 540 (Log) 540 (Log) FL3 Voltage 650 (Log) FL1 – ﹪ FL2 % % % % FL2 – ﹪ FL1 % % % % FL2 – ﹪ FL3 % % % % FL3 – ﹪ FL2 % % % % 表三、 需定期更換耗材 需定期更換耗材 更 換 時 機 BD目錄號 BD Falcon 352052 試管 上機專用試管。 352052（泛泰公司 0800213029） BD Falcon 352235 試管 附濾網(wǎng) FALCON試管，上機前去除樣品中之細胞團塊，防止管路堵塞。 352235（泛泰公司 0800213029） BD FACSFlow 上機用平衡緩沖液。體積 20公升。 342020（騰達行 0227202215） BD FACSClean 專為細胞儀日常清潔設計。體積 5 公升。 340345（騰達行 0227202215） BD FACSRinse 專為細胞儀日常除污設計。體積 5 公升。 340346（騰達行 0227202215） Mesh Filter 以尼龍篩網(wǎng)去除樣品中之細胞團塊，防止管路堵塞。 HydroBios 55?m（信安儀器 0223654317）