流式細胞儀分析技術(shù)-資料下載頁
2025-04-30 01:22本頁面
【正文】 胞、 CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示對化療藥物耐藥 四、腫瘤耐藥基因分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 HLAB27可出現(xiàn)在 58%～ 97%的強直性脊椎炎 (As) 患者 六、自身免疫病相關(guān) HLA抗原分析 FCM作為一個強大的技術(shù)平臺，已應(yīng)用于多個領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前移植免疫中的 FCM應(yīng)用主要包括流式細胞術(shù)的交叉配型（ Flow cytometry crossmatching, FCXM）和群體反應(yīng)性抗體（ Panel reactive antibody, PRA）檢測。 七、移植免疫中的應(yīng)用 小 結(jié) ?流式細胞術(shù)（ FCM）是在保持細胞及細胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實現(xiàn)對單個細胞進行定量分析或純化分選。 ?FCM分析中前向散射光反映顆粒的大?。粋?cè)向散射光反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度；熒光反映顆粒被染上熒光部分數(shù)量的多少，根據(jù)其標(biāo)記的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表達情況。 ?同型對照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，可使熒光標(biāo)記單抗的信號保持其特異性。 ?對各項工作環(huán)節(jié)和儀器性能進行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證 FCM分析中各項檢測數(shù)據(jù)和指標(biāo)可靠性的關(guān)鍵。 以北京寶賽生生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 AnnexinvFITC凋亡檢測試劑盒為例，介紹一種 AnnexinvFITC和 PI雙標(biāo)記流式細胞檢測法。 第五部分、應(yīng)用舉例 膜聯(lián)蛋白 V(AnnexinV) 一種分子量 為 3536KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（ phosphatidylserine, PS）高親和力特異性結(jié)合。 碘化丙啶（ propidium iodide, PI)是一種核酸染料，將 AnnexinV與 PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。 以熒光素 FITC標(biāo)記了的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細胞儀檢測細胞凋亡的發(fā)生。 一、概述 （ 1） AnnexinvFITC凋亡檢測試劑盒：包括 Annexin VFITC(20μg/ml) ，結(jié)合緩沖液，碘化丙啶(50μg/ml ）， 4℃ 保存。 （ 2）流式細胞儀 二、用品 （ 1）調(diào)整待測細胞的密度為 5 105－ 1 106個 /ml。 （ 2）取 1ml細胞， 1000rpm 4℃ 離心 10min，棄上清液。 （ 3）加入 1ml冷的 PBS，輕輕震蕩，使細胞懸浮。 （ 4） 1000rpm 4℃ 離心 10min，棄上清液。 （ 5）重復(fù)步驟 (3)(4)兩次。 （ 6）對于貼壁細胞，先用 %胰蛋白酶消化，制成單個細胞懸液，再用 PBS離心洗滌。 （ 7）將細胞重新懸浮于 200μl 結(jié)合緩沖液。 （ 8） 加入 10μlAnnexin V FITC和 50μl 的 PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng) 15min或4℃ 反應(yīng) 30min。 （ 9）加入 300μl 結(jié)合緩沖液，立即上機（流式細胞儀）檢測，光源為 488nm氬離子激光器， FITC受激發(fā)后發(fā)綠色熒光， PI發(fā)紅色熒光。 三、步驟 流式細胞儀分析，獲得由四個象限組成的細胞直方圖（ cytogram），每個象限的細胞數(shù)目就是在檢測細胞總數(shù)所在點的組分。 左下象限代表正常細胞（ AnPI），右下象限代表早期凋亡細胞（ An+PI)，右上象限代表晚期凋亡細胞和壞死細胞（ An+PI+），左上象限代表細胞收集過程中出現(xiàn)的損傷細胞（ AnPI+）。 四、結(jié)果分析
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