20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)的原理和應(yīng)用(參考版)
2024-11-15 05:41本頁面
【正文】 ,。y224。微量溶血分光光度法測定抗體形成細(xì)胞——QHS。待測品單位數(shù)=S/A標(biāo)準(zhǔn)品單位。n)優(yōu)化相對簡單。優(yōu)點(diǎn)：分析簡單，實驗(sh237。結(jié)果判定——融解曲線。mRNAcDNAPCR。ir243。,thank you,第一百一十四頁，共一百一十五頁。)采取有效措施。 組織器官移植后對受者的細(xì)胞免疫學(xué)功能監(jiān)測則有利于排斥反應(yīng)的早期發(fā)現(xiàn)，以便及時(j237。nɡ)應(yīng)用,反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)。,（三）臨床(l237。)的DBA/2小鼠肥大細(xì)胞瘤P815的殺傷活性。y242。nɡ)α萘醋酸法,第一百一十一頁，共一百一十五頁。ng),酸性磷酸酶的測定 硝酸鉛法 偶氮法 非特異性酯酶的測定 常用(ch225。,（3）巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定(c232。)具有很強(qiáng)的吞噬功能，常用雞紅細(xì)胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細(xì)胞。)功能檢測,巨噬細(xì)胞對顆粒性抗原物質(zhì)(w249。,第一百零九頁，共一百一十五頁。ndu224。ng)檢測,炭粒廓清試驗： 正常小鼠肝中枯否細(xì)胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10%炭粒。,第一百零八頁，共一百一十五頁。n)試驗,硝基藍(lán)四氮唑，又稱四唑氮藍(lán)(nitroblue tetrazolium, NBT)，是一種水溶性的淡黃色活性染料，可被中性粒細(xì)胞的酶還原為非水溶性的藍(lán)黑色甲月替(Formazan)顆粒,沉淀于胞漿內(nèi)； 細(xì)菌、真菌和寄生蟲感染時，中性白細(xì)胞還原NBT的能力增高； 病毒性感染或非感染性疾病則不增高； NBT還原試驗作為診斷全身性感染的一種輔助方法，并作為判定嗜中性白細(xì)胞殺菌功能的指標(biāo)，以診斷吞噬(tūnsh236。,NBT還原(hu225。,(2)吞噬和殺菌功能(gōngn233。,方法(fāngfǎ)：,瓊脂糖平板(p237。bāo)運(yùn)動功能——趨化功能檢測,原理(yu225。) 吞噬和殺菌功能的檢測,第一百零四頁，共一百一十五頁。,1.中性(zhōngx236。y242。,（二）吞噬細(xì)胞功能(gōngn233。xīn)取上清 測LDH或AKP,離心取沉淀 測活細(xì)胞(x236。,染色(rǎns232。 將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)B細(xì)胞的功能。ngyu225。,(4)體內(nèi)(tǐ n232。 優(yōu)點(diǎn)： 穩(wěn)定、特異、抗原用量少； 可同時檢測不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌，并可定量； 可檢測組織切片中分泌抗體的單個細(xì)胞。,該方法既可檢測抗體分泌細(xì)胞(x236。,B細(xì)胞抗體(k224。 評價免疫治療或免疫重建后機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力。,溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術(shù)等因素(yīn s249。i)結(jié)合了抗體分子的羊紅細(xì)胞溶解形成肉眼可見的溶血空斑。,原理(yu225。)單個抗體形成細(xì)胞（漿細(xì)胞）的方法。nɡ xu232。ng)細(xì)胞——QHS 溶血空斑實驗 PFC——液相小室法 固相瓊脂法 ELISPOT檢測特異性抗體形成細(xì)胞功能,第九十五頁，共一百一十五頁。ngtǐ)形成細(xì)胞檢測,微量溶血分光光度法測定抗體形成(x237。bāo)增殖,形態(tài)學(xué),3H－TdR摻入法,第九十四頁，共一百一十五頁。bāo)增殖能力檢測,抗IgM 細(xì)菌(x236。ng)的檢測 體內(nèi)試驗,第九十三頁，共一百一十五頁。,2. B細(xì)胞(x236。ngyu225。,（4）體內(nèi)(tǐ n232。ng)γ射線,B.方法(fāngfǎ),意義： 腫瘤患者CTL殺傷(shāshāng)腫瘤細(xì)胞的能力,第九十頁，共一百一十五頁。,形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞 計數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞 同位素法 ：淋巴細(xì)胞（CTL）+含51Cr 的腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞破壞 51Cr 釋放 測定(c232。n),T細(xì)胞(x236。nlǐ)：,靶細(xì)胞抗原(k224。,第八十八頁，共一百一十五頁。 評價機(jī)體細(xì)胞免疫水平； 測定腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，常作為判斷預(yù)后和觀察療效的指標(biāo)之一； 選用適當(dāng)?shù)陌屑?xì)胞，常用可傳代的已建株的人腫瘤細(xì)胞如人肝癌、食管癌、胃癌等細(xì)胞株，經(jīng)培養(yǎng)(p233。bāo)介導(dǎo)的細(xì)胞(x236。,第八十七頁，共一百一十五頁。)功能測定,體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后,分泌各種細(xì)胞因子,可借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平，以反映(fǎny236。)淋巴細(xì)胞增殖,第八十六頁，共一百一十五頁。bāo)內(nèi)線粒體脫氫還原酶,還原CCK8,水溶性、黃色甲躦顆粒,光密度值,酶標(biāo)儀,第八十五頁，共一百一十五頁。ch233。,CCK8法 (Cell Counting Kit 8),外周血或分離(fēnl237。 缺點(diǎn)(quēdiǎn)：但需一定設(shè)備條件，同時還存在放射性核素污染問題。,SI＝PHA刺激管cpm均值(jūn zh237。ng)增加,3HTdR,3H摻入到DNA中,液體(y232。)的淋巴細(xì)胞,PHA,共培養(yǎng),DNA合成(h233。,第八十二頁，共一百一十五頁。)結(jié)果。,第八十一頁，共一百一十五頁。 pi224。i)計數(shù)法,外周血或分離(fēnl237。,形態(tài)(x237。y224。ngt224。nɡ y242。n bā)母細(xì)胞化,核酸、蛋白合成增加 細(xì)胞體積增大 分裂、增殖,模擬特異性抗原刺激下T細(xì)胞的分裂、增殖過程 反映T細(xì)胞功能和機(jī)體細(xì)胞免疫水平,第七十八頁，共一百一十五頁。bāo),非特異性抗原刺激,植物血凝素(PHA)人 刀豆(dāo d242。 zhǒnɡ)抗原：破傷風(fēng)類毒素、鏈球菌激酶、純化蛋白衍生物（purifiedproteinderivative，PPD）和白色念珠菌 同種組織抗原：HLA 非特異性刺激物： PHA： 人T細(xì)胞 ConA：小鼠T細(xì)胞 PWM： T、 B細(xì)胞 LPS： B細(xì)胞,第七十七頁，共一百一十五頁。,第七十六頁，共一百一十五頁。ng),分化,母細(xì)胞,刺激物,細(xì)胞變大,細(xì)胞漿擴(kuò)大,空泡,核仁明顯,核染色質(zhì)疏松,第
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