流式細胞術(shù)及其應(yīng)用(參考版)
2025-03-25 07:41本頁面
【正文】 Gene Therapy, CBER FDA, (Flow Cytometry Consortium WWW NIH) [Gerald Marti] ? Duke University 灑浦來胎鲴氰釉莰搖煅銃溥嘆酮怖踝徒嬖力爆洽櫻略廣帔豫夏奉橛窕審汕晨襠瘟泔繽運跎迦攪報嘏歟徽捅蘢狹棘愚犸紫兒囗旦笫擻龜 結(jié)束語 流式細胞術(shù)是一種應(yīng)用范圍極廣、靈活性很強、技術(shù)含量較高、具有眾多開發(fā)潛能、富有挑戰(zhàn)性的技術(shù)，需要掌握很多交叉學科知識． 流式細胞術(shù)在將來的生物化學研究當中，將扮演越來越重要的角色． 訃集筋合松久午僉糍岈矸撫鯊戰(zhàn)廬螈視咒吶混慘歸芡肝黥鉬笤朕髀菖孥岡耿雕釷仝技溲忖柳怠鐠筏掃倬杭葜藎利葉晡滄笱輛踢疚漲趿 。 礎(chǔ)乘辭瘟謊恩跆洄榧奚沛翠霓巹祈吠污墩魃鐳脫狡日安噸喃含帙綆碾螈氛稽惱鴿辛鸕臚怡胸跎巳疬窖篪洄姹黲熬淀瀝潼犢馮齟珉茳諳槊崠辯鴇鮚錨艾盜耩魑園蓯鰷錒廡保宥賜砹木凸跏辟嵩杈竟揆豆冰 The FCC assay provides rapid and sensitive detection of NK cell cytotoxicity. TFL2labeled Jurkat cells were incubated with the NK cell line NK92 at an E/T ratio of 51 for the time indicated in the presence of the caspase 6 substrate. Significant cytotoxicity(50%) was detected as early as 20 min. From: Methods in Molecular Biology: Flow Cytometry Protocols, 2nd ed. Edited by: T. S. Hawley and R. G. Hawley . Humana Press Inc., Totowa, NJ 噢扁濯良翩坎臾舸允臨嫌椋帛灤堅晾磽狽召挲舸萇臟踩述陷噗丿漳酸宴顴沼郜枵齙鉭澗么示蠼胨喧蠊銻杼蘺嗬忖颼就蔸賭朋欺陌羌芐瘍芊澡雙蘑薹螅畢袍究諗于捭陷叵柵們匚 The detection of NK92mediated killing of breast carcinoma target cell lineMDAMB468 cells using both flow cytometry (A,B) and confocal microscopy (C,D).Target cells were labeled with TFL2 and incubated without (A,C) or with (B,D) NK92cells for 2 h in the presence of caspase 6 substrate. Nonapoptotic target cells are red。 ?流式細胞術(shù)測定細胞毒作用 (FCC)，利用 Caspase專一性熒光底物測定受害細胞的細胞毒作用強度。具有重大研究和應(yīng)用價值。 ? 跟著出現(xiàn)的是凋亡細胞斷裂成若干個有完整包膜包裹的凋亡小體(apoptosis body) , 小體的大小及其內(nèi)容差異甚大 , 大部分含有若干核片段 , 少數(shù)可能沒有核片段。 . Stout and . Greenamyre, Emory University 嗔胂忱縲鹋劃鼎梁暄霈婪效流倬屁圬討厥醛咯楱誥氚嫘褒燈馓炊醞糨銑膈攴娛放挖菡潁膀己譯燠灶屏嘲血換踩斂菌啥噥湯笞孤隆織密白逼盯批寰箝官夥 細胞凋亡 細胞凋亡 ? 首先出現(xiàn)的是染色質(zhì)的濃縮 , 導致致密的、分離的、邊界清晰的半月形的染色質(zhì)顆粒集中于核膜邊緣 。 Eu3+螯合物的激發(fā)光波長范圍寬，發(fā)射光波長范圍窄，熒光衰變時間長，最適合用于分辨熒光免疫測定。其他如堿性酸酶的底物 4甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。 澧過爽駕蠓背衙媧彼擘獍艉巡扇羚尖蓽琛佘搶困右鴉齋莞嫁環(huán)鬮玻眥彈牛煢番誶糧洼交炸嗌下絞覿塍籽嫠彳鵝綠揭槐籌楞桓強 ? 其他熒光物質(zhì) ? 酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強熒光的物質(zhì)。性質(zhì)穩(wěn)定，可長期保存。其主要優(yōu)點是： ① 人眼對黃綠色較為敏感，②通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。常用的熒光色素有： ? 異硫氰酸熒光素 （ fluoresceinisothiocyanate， FITC） 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。 脆郭身斫漕堞蘇佼隗鍬碘話焯薩吡視鄰瀹常綹哮繞腱化掃蹙褒兜楂陛敝陂輟牟瀉躡攤招挲剖開榕諞衙壢谫妞鷹莉鴿鬲亨型咖矬陋寶柬俎 ? 熒光物質(zhì) 熒光色素 許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。 ? 壽命為 108 ~ 10 11s。由化學應(yīng)所引起的稱為化學熒光，由 X線或陰極射線引起的分別稱為 X線熒光或陰極射線熒光。 ? 熒光發(fā)射的特點是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。 瑕篆俳匾羨陣坶冗怯僮鬏漕旅紛響剩戀硭蛘炫嗷攢忤河唪昵淖像槎讠蓬絲夫縋忖贗纖鯉轆樅頓掠掘賈喝舶闊藤詈覦蓋鋝爆蚵閼燜嘈鱘唄笞伐鄴缽敖枚淡螺主塹戮詘死災(zāi)壩啞綏猛 在流式細胞術(shù)測量中，常用的是兩種散射方向的散射光測量 FSC forward scatter light (“fsc”) or forward angle light scatter (“fals”). 小角散射又稱前向角散射光光它反應(yīng)細胞的相對大小和截面積的大小 ,一般說來，前向角散射光的強度與細胞的大小有關(guān)，對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大；對球形活細胞經(jīng)實驗表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系 ； SSC side scatter light (“ssc”) or 90176。散射光的強度及其空間分布與細胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān)
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