20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)及其科研應(yīng)用(參考版)
2024-11-11 18:47本頁面
【正文】 ,。細(xì)胞凋亡——Caspases3。)）。標(biāo)記(biāoj236。Anti–IFN–。在Lamp。ng)總結(jié),流式細(xì)胞術(shù) 及其科研應(yīng)用。,內(nèi)容(n232。,謝謝(xi232。njiū) 鈣離子檢測(cè),第一百零二頁，共一百零五頁。)的測(cè)定,第一百零一頁，共一百零五頁。,酶活力(hu243。,流式細(xì)胞儀的 其它(q237。 232。,Hoechst 33342染色的小鼠骨髓(ɡǔ suǐ)中 SP表型和HSCs表面抗原表達(dá)的關(guān)系,右圖顯示的是KLS (cKit＋Lin－Sca1＋) 細(xì)胞(x236。 232。nd236。)的C57Bl/6小鼠的全骨髓細(xì)胞,Hoechst單染,Hoechst/PI雙染,第九十七頁，共一百零五頁。,第九十六頁，共一百零五頁。 SP細(xì)胞群缺乏明確的Marker，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)活細(xì)胞染料Hoechst 33342的染色排斥是目前最準(zhǔn)確和推薦的鑒定方法，用該染料活染SP細(xì)胞時(shí)，經(jīng)紫外激發(fā)表現(xiàn)為Hoechst 33342雙波長(bōch225。ng)和分離,大部分SP細(xì)胞保持原始細(xì)胞的ckit＋Sca1＋Lin－表型。,SP細(xì)胞的鑒定(ji224。ow249。,為什么要研究(y225。njiū),SP細(xì)胞(x236。,流式 amp。nx237。bāo)進(jìn)行FISH,第九十二頁，共一百零五頁。,第九十一頁，共一百零五頁。,流式與分子生物學(xué)FISH,以流式細(xì)胞儀分選目的細(xì)胞 分選后的細(xì)胞進(jìn)行FISH 右圖顯示未分選前混合細(xì)胞 較小的PBMCs顯示有兩個(gè)紅色斑點(diǎn)( X探針(t224。)較高的特異性細(xì)胞群，減少研究中的干擾因素，獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。njiū),除了將分選得到的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)研究外，F(xiàn)CM分選系統(tǒng)可為PCR、FISH等分子技術(shù)提供純度(chnjiū),第八十九頁，共一百零五頁。bāo)凋亡——BrdU,第八十八頁，共一百零五頁。nɡ)檢測(cè)（BrdU法）,第八十七頁，共一百零五頁。nɡ)檢測(cè)（Annexin V/PI法）,第八十六頁，共一百零五頁。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十五頁，共一百零五頁。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十四頁，共一百零五頁。bāo)凋亡——Caspases3,第八十三頁，共一百零五頁。bāo)凋亡——Active Caspases3,第八十二頁，共一百零五頁。ng)G0/G1期細(xì)胞,第八十一頁，共一百零五頁。nɡ)細(xì)胞,正常(zh232。,細(xì)胞(x236。nɡ)的分析,細(xì)胞凋亡的主要表現(xiàn)(biǎoxi224。ng) 腫瘤,第七十九頁，共一百零五頁。bāo)凋亡的分析,細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死是兩個(gè)不同的過程 細(xì)胞凋亡的主要檢查手段 形態(tài)學(xué)檢查 DNA Ladders實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞儀檢查 與凋亡相關(guān)的病理過程 HIV 自身免疫性疾病(j237。nɡ)檢測(cè),第七十八頁，共一百零五頁。ng)上等同于人MDC和PDC 小鼠DC制備：小鼠骨髓 BD? IMag Mouse Dendritic Cell Enrichment Set 大鼠DC：常用標(biāo)志OX62，OX6（MHCⅡ），CD80，CD86等,第七十七頁，共一百零五頁。 yǒu)標(biāo)志 CD83：充分成熟標(biāo)志 CD86：DC成熟過程中表達(dá)增加,第七十六頁，共一百零五頁。,監(jiān)控(jiān k242。,DC體外誘導(dǎo)(y242。ng),PDC：linnegCD11cnegCD123high；MDC：linnegCD11chighCD123low 二者還都高表達(dá)(biǎod225。,人外周血DC亞群的鑒定(ji224。jī)分子，而未成熟DC不表達(dá)或低表達(dá)這些分子 未成熟DC具有強(qiáng)大的內(nèi)吞作用，并高表達(dá)大多數(shù)趨化因子受體 所有DC共同的突出特點(diǎn)是能高水平表達(dá)MHCII類分子如HLADR，DC成熟過程突出的標(biāo)志是MHCII類分子的重分布，從主要在細(xì)胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕诩?xì)胞膜表面。n)標(biāo)志,人DC的主要特征性表面標(biāo)志為CD1a和CD83，CD83還是DC充分成熟的標(biāo)志。bāo)的可塑性,DC在不同細(xì)胞因子和生長因子的作用下可以向著不同的方向分化 DC分化過程中的不同刺激引導(dǎo)它們向多種組織和器官移動(dòng)，在這些組織中擔(dān)當(dāng)(dāndāng)起對(duì)抗入侵感染因素的哨兵,第七十二頁，共一百零五頁。,A review of Jacques Banchereau,第七十一頁，共一百零五頁。 在外周血中至少有兩種DC前體被鑒定出來： Plasmacytoid DC——PDC——漿細(xì)胞樣的樹突細(xì)胞 Myeloid DC——MDC——髓樣的樹突細(xì)胞 血液中的前體DC隨血液遷移到皮膚、胃腸道、心、肝、肺等非淋巴器官發(fā)育為未成熟DC 未成熟DC攝取外來抗原后，可自發(fā)(z236。,DC的分化(fēnhu224。,樹突狀細(xì)胞(x236。,現(xiàn)有(xi224。,現(xiàn)有(xi224。mi225。)指標(biāo)可自由組合,第六十五頁，共一百零五頁。,CBA Kit與CBA Flex Set,CBA Kit 同時(shí)檢測(cè)6或者(hu242。nlǐ)：Flex Set微球帶有近紅外和紅色兩種熒光，分別在流式細(xì)胞儀的FL3（近紅外熒光）和FL4（紅色熒光）通道檢測(cè)，通過這個(gè)二維矩陣（對(duì)應(yīng)于微球上的特定序號(hào)）識(shí)別捕獲微球，從而鑒定目的蛋白，PE標(biāo)記的檢測(cè)抗體在FL2通道來對(duì)目的蛋白定量,new,第六十三頁，共一百零五頁。)免疫T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌水平 A，B，C為稀釋標(biāo)準(zhǔn)，D為無處理對(duì)照組，E為PSA3A處理組，F(xiàn)為PSA3處理組 摘自Terasawa H, et al. Clinical Cancer Research.Vol.8,4153, January 2002 上述研究發(fā)現(xiàn)PSA3A比PSA3能更有效的殺傷前列腺腫瘤，與PSA3A能刺激T細(xì)胞分泌更高水平的ILILIL5和IFNγ有關(guān)，為后續(xù)藥物
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