20xx年醫(yī)學專題—流式細胞術及其科研應用-資料下載頁
2024-11-11 18:47本頁面
【正文】 adders實驗 流式細胞儀檢查 與凋亡相關的病理過程 HIV 自身免疫性疾病(j237。b236。ng) 腫瘤,第七十九頁，共一百零五頁。,細胞凋亡(diāo w225。nɡ)的分析,細胞凋亡的主要表現(xiàn)(biǎoxi224。n) 細胞內水解酶改變：如Caspase3活化 細胞膜不對稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：Annexin V/PI 細胞核DNA的斷裂改變：TUNNEL實驗（APOBRDU，APODIRECT） 凋亡相關蛋白： Fas Bcl2,第八十頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——PI分析,PI Fluorescence, Events,凋亡(diāo w225。nɡ)細胞,正常(zh232。ngch225。ng)G0/G1期細胞,第八十一頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——Active Caspases3,第八十二頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——Caspases3,第八十三頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十四頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十五頁，共一百零五頁。,凋亡(diāo w225。nɡ)檢測（Annexin V/PI法）,第八十六頁，共一百零五頁。,凋亡(diāo w225。nɡ)檢測（BrdU法）,第八十七頁，共一百零五頁。,細胞(x236。bāo)凋亡——BrdU,第八十八頁，共一百零五頁。,流式分選 與 分子生物學研究(y225。njiū),第八十九頁，共一百零五頁。,流式分選與分子生物學研究(y225。njiū),除了將分選得到的細胞進行后續(xù)培養(yǎng)研究外，F(xiàn)CM分選系統(tǒng)可為PCR、FISH等分子技術提供純度(chnd249。)較高的特異性細胞群，減少研究中的干擾因素，獲得更準確的實驗結果。,第九十頁，共一百零五頁。,流式與分子生物學FISH,以流式細胞儀分選目的細胞 分選后的細胞進行FISH 右圖顯示未分選前混合細胞 較小的PBMCs顯示有兩個紅色斑點( X探針(t224。n zhēn))，較大的Daudi細胞顯示有一個紅色斑點及一個綠色斑點。,第九十一頁，共一百零五頁。,分選后的細胞(x236。bāo)進行FISH,第九十二頁，共一百零五頁。,分選后細胞進行(j236。nx237。ng)PCR分析,第九十三頁，共一百零五頁。,流式 amp。 干細胞研究(y225。njiū),SP細胞(x236。bāo),第九十四頁，共一百零五頁。,為什么要研究(y225。njiū)干細胞,干細胞替代治療 治療血液疾病的骨髓移植、臍帶血移植比較成熟 應用骨髓干細胞移植治療心肌梗死和血管性疾病 骨髓間充質干細胞等對神經系統(tǒng)疾病、糖尿病的治療作用已在動物模型中取得一定進展 藥物(y224。ow249。)篩選 利用干細胞的分化潛能體外構建各種組織模型，通過基因修飾等手段研究藥物作用靶點，毒理、藥理等 發(fā)育生物學基礎理論研究 通過gainoffunction和lossoffunction研究基因在分化、發(fā)育中的功能 借助體細胞核轉移技術建立各種疾病的干細胞模型研究疾病成因及治療途徑,第九十五頁，共一百零五頁。,SP細胞的鑒定(ji224。nd236。ng)和分離,大部分SP細胞保持原始細胞的ckit＋Sca1＋Lin－表型。Nakauchi等研究認為，CD34low/－ckit＋Sca1＋Lin－細胞和SP細胞有一個很大的交叉，而長期的骨髓造血活性只發(fā)現(xiàn)在CD34low/－ckit＋Sca1＋Lin－的細胞。 SP細胞群缺乏明確的Marker，利用流式細胞儀檢測其對活細胞染料Hoechst 33342的染色排斥是目前最準確和推薦的鑒定方法，用該染料活染SP細胞時，經紫外激發(fā)表現(xiàn)為Hoechst 33342雙波長(bōch225。ng)熒光陰性或弱陽性的細胞群體，能與非SP細胞區(qū)分。,第九十六頁，共一百零五頁。,Hoechst染色(rǎns232。)的C57Bl/6小鼠的全骨髓細胞,Hoechst單染,Hoechst/PI雙染,第九十七頁，共一百零五頁。,流式鑒定(ji224。nd236。ng)小鼠骨髓和CD34富集的人臍血中的SP細胞,——摘自Flow Cytometry Protocols （第二(d236。 232。r)版）,第九十八頁，共一百零五頁。,Hoechst 33342染色的小鼠骨髓(ɡǔ suǐ)中 SP表型和HSCs表面抗原表達的關系,右圖顯示的是KLS (cKit＋Lin－Sca1＋) 細胞(x236。bāo)，可見KLS細胞在SP區(qū)域內高度富集,——摘自Flow Cytometry Protocols （第二(d236。 232。r)版）,第九十九頁，共一百零五頁。,流式細胞儀的 其它(q237。tā)應用,第一百頁，共一百零五頁。,酶活力(hu243。l236。)的測定,第一百零一頁，共一百零五頁。,動力學研究(y225。njiū) 鈣離子檢測,第一百零二頁，共一百零五頁。,流式網絡資源,關鍵詞搜索(sōu suǒ)：FCM，F(xiàn)ACS，流式 www.bdbiosciences.com www.cytometry.cn（中文）,第一百零三頁，共一百零五頁。,謝謝(xi232。 xie)！,第一百零四頁，共一百零五頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,流式細胞術 及其科研應用。從細胞膜成分到細胞內成分分析。在Lamp。L病理形態(tài)學不能做出診斷前可提供確切診斷信息。Anti–IFN–。應用實例：分析1型與2型免疫反應。標記(biāoj236。)熒光探測試劑（FITC或PE標記(biāoj236。)）。細胞凋亡——Active Caspases3。細胞凋亡——Caspases3。謝謝,第一百零五頁，共一百零五頁
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