20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞術(shù)及其科研應(yīng)用-資料下載頁
2025-11-02 18:47本頁面
【正文】 adders實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞儀檢查 與凋亡相關(guān)的病理過程 HIV 自身免疫性疾病(j237。b236。ng) 腫瘤,第七十九頁，共一百零五頁。,細(xì)胞凋亡(diāo w225。nɡ)的分析,細(xì)胞凋亡的主要表現(xiàn)(biǎoxi224。n) 細(xì)胞內(nèi)水解酶改變：如Caspase3活化 細(xì)胞膜不對(duì)稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：Annexin V/PI 細(xì)胞核DNA的斷裂改變：TUNNEL實(shí)驗(yàn)（APOBRDU，APODIRECT） 凋亡相關(guān)蛋白： Fas Bcl2,第八十頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——PI分析,PI Fluorescence, Events,凋亡(diāo w225。nɡ)細(xì)胞,正常(zh232。ngch225。ng)G0/G1期細(xì)胞,第八十一頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——Active Caspases3,第八十二頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——Caspases3,第八十三頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十四頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——Annexin Ⅴ,第八十五頁，共一百零五頁。,凋亡(diāo w225。nɡ)檢測(cè)（Annexin V/PI法）,第八十六頁，共一百零五頁。,凋亡(diāo w225。nɡ)檢測(cè)（BrdU法）,第八十七頁，共一百零五頁。,細(xì)胞(x236。bāo)凋亡——BrdU,第八十八頁，共一百零五頁。,流式分選 與 分子生物學(xué)研究(y225。njiū),第八十九頁，共一百零五頁。,流式分選與分子生物學(xué)研究(y225。njiū),除了將分選得到的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)研究外，F(xiàn)CM分選系統(tǒng)可為PCR、FISH等分子技術(shù)提供純度(chnd249。)較高的特異性細(xì)胞群，減少研究中的干擾因素，獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,第九十頁，共一百零五頁。,流式與分子生物學(xué)FISH,以流式細(xì)胞儀分選目的細(xì)胞 分選后的細(xì)胞進(jìn)行FISH 右圖顯示未分選前混合細(xì)胞 較小的PBMCs顯示有兩個(gè)紅色斑點(diǎn)( X探針(t224。n zhēn))，較大的Daudi細(xì)胞顯示有一個(gè)紅色斑點(diǎn)及一個(gè)綠色斑點(diǎn)。,第九十一頁，共一百零五頁。,分選后的細(xì)胞(x236。bāo)進(jìn)行FISH,第九十二頁，共一百零五頁。,分選后細(xì)胞進(jìn)行(j236。nx237。ng)PCR分析,第九十三頁，共一百零五頁。,流式 amp。 干細(xì)胞研究(y225。njiū),SP細(xì)胞(x236。bāo),第九十四頁，共一百零五頁。,為什么要研究(y225。njiū)干細(xì)胞,干細(xì)胞替代治療 治療血液疾病的骨髓移植、臍帶血移植比較成熟 應(yīng)用骨髓干細(xì)胞移植治療心肌梗死和血管性疾病 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞等對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病的治療作用已在動(dòng)物模型中取得一定進(jìn)展 藥物(y224。ow249。)篩選 利用干細(xì)胞的分化潛能體外構(gòu)建各種組織模型，通過基因修飾等手段研究藥物作用靶點(diǎn)，毒理、藥理等 發(fā)育生物學(xué)基礎(chǔ)理論研究 通過gainoffunction和lossoffunction研究基因在分化、發(fā)育中的功能 借助體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)建立各種疾病的干細(xì)胞模型研究疾病成因及治療途徑,第九十五頁，共一百零五頁。,SP細(xì)胞的鑒定(ji224。nd236。ng)和分離,大部分SP細(xì)胞保持原始細(xì)胞的ckit＋Sca1＋Lin－表型。Nakauchi等研究認(rèn)為，CD34low/－ckit＋Sca1＋Lin－細(xì)胞和SP細(xì)胞有一個(gè)很大的交叉，而長期的骨髓造血活性只發(fā)現(xiàn)在CD34low/－ckit＋Sca1＋Lin－的細(xì)胞。 SP細(xì)胞群缺乏明確的Marker，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)活細(xì)胞染料Hoechst 33342的染色排斥是目前最準(zhǔn)確和推薦的鑒定方法，用該染料活染SP細(xì)胞時(shí)，經(jīng)紫外激發(fā)表現(xiàn)為Hoechst 33342雙波長(bōch225。ng)熒光陰性或弱陽性的細(xì)胞群體，能與非SP細(xì)胞區(qū)分。,第九十六頁，共一百零五頁。,Hoechst染色(rǎns232。)的C57Bl/6小鼠的全骨髓細(xì)胞,Hoechst單染,Hoechst/PI雙染,第九十七頁，共一百零五頁。,流式鑒定(ji224。nd236。ng)小鼠骨髓和CD34富集的人臍血中的SP細(xì)胞,——摘自Flow Cytometry Protocols （第二(d236。 232。r)版）,第九十八頁，共一百零五頁。,Hoechst 33342染色的小鼠骨髓(ɡǔ suǐ)中 SP表型和HSCs表面抗原表達(dá)的關(guān)系,右圖顯示的是KLS (cKit＋Lin－Sca1＋) 細(xì)胞(x236。bāo)，可見KLS細(xì)胞在SP區(qū)域內(nèi)高度富集,——摘自Flow Cytometry Protocols （第二(d236。 232。r)版）,第九十九頁，共一百零五頁。,流式細(xì)胞儀的 其它(q237。tā)應(yīng)用,第一百頁，共一百零五頁。,酶活力(hu243。l236。)的測(cè)定,第一百零一頁，共一百零五頁。,動(dòng)力學(xué)研究(y225。njiū) 鈣離子檢測(cè),第一百零二頁，共一百零五頁。,流式網(wǎng)絡(luò)資源,關(guān)鍵詞搜索(sōu suǒ)：FCM，F(xiàn)ACS，流式 www.bdbiosciences.com www.cytometry.cn（中文）,第一百零三頁，共一百零五頁。,謝謝(xi232。 xie)！,第一百零四頁，共一百零五頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),流式細(xì)胞術(shù) 及其科研應(yīng)用。從細(xì)胞膜成分到細(xì)胞內(nèi)成分分析。在Lamp。L病理形態(tài)學(xué)不能做出診斷前可提供確切診斷信息。Anti–IFN–。應(yīng)用實(shí)例：分析1型與2型免疫反應(yīng)。標(biāo)記(biāoj236。)熒光探測(cè)試劑（FITC或PE標(biāo)記(biāoj236。)）。細(xì)胞凋亡——Active Caspases3。細(xì)胞凋亡——Caspases3。謝謝,第一百零五頁，共一百零五頁
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