流式細胞術(shù)的樣品制備(參考版)
2025-05-14 07:14本頁面
【正文】 2040ml， 離心沉淀 ， 并以生理鹽水洗兩次 ， 。 %冷乙醇固定 ， 置于冰箱備檢 。 ㈣ 內(nèi)鏡 刷檢 樣品單細胞懸液制備 10ml鹽水中洗脫 ， 收集懸液進入試管 ,以 1500prm離心沉淀 ， 再以生理鹽水漂洗 23次 ， 每次500800prm離心沉淀 2分鐘 ， 棄上清 。 枸櫞 酸緩沖液 5ml， 在室溫下放置 20分鐘。 ㈢ 胸腹水 脫落細胞的制備 200300ml， 加入抗凝劑 (肝素或 枸櫞 酸 鈉 )5ml，放入容器中置 4℃ 冰箱靜置 612小時 ， 棄上清 。 1X106/ml,可進行標記染色上機 ,如不馬上檢測可用 70% 的冰乙醇固定保存。 ,以 1500prm離心沉淀 ,用生理鹽水洗滌 2次 ,每次 5分鐘 ,棄上清后加入 70%乙醇 3ml固定備檢 。 三、脫落細胞單細胞懸液的制備 在臨床實際工作中 ， 可收集到大量自然脫落的細胞 ， 這些細胞標本經(jīng)過簡單的處理 ， 就可得到較好的單分散細胞懸液 ， 所以是流式細胞術(shù)檢測的天然樣品 ， 下面介紹幾種常見的脫落細胞樣品制備方法。 ,以 丫啶 橙染色 ,置熒光顯微鏡下觀察形態(tài)和純度 。 ,用%胰 酶消化 10－ 15分鐘 ,室溫下 ,并不斷搖震 ,以促使細胞脫落下 ,單核細胞的粘附力很強 ,用酶消化往往獲得細胞數(shù)少 ,目前亦采用機械的方法 ,用一橡皮刷 ,伸入培養(yǎng)瓶在瓶壁上輕擦 ,將細胞刮取下 ,但切勿用力過大 ,造成細胞損傷過多 。 ,放入培養(yǎng)瓶內(nèi) ,將稀釋血加入 培養(yǎng)液中 ,混勻 ,與培養(yǎng)瓶接觸面要大。 ⒌再以 Hank′s液洗滌 2次，即可獲得純度大于 95%以上的粒細胞。 ⒊以吸管慢慢將粒細胞層吸出，置另一支離心管內(nèi)，以5ml的 Hank′s液洗滌三次，每次離心沉淀 1500prm， 10分鐘。 ㈡ 粒細胞的制備 ⒈用淋巴細胞分離液對細胞進行分層。 ⒋用吸管將上層與中層之間的淋巴細胞吸出，收集到另一支離心管，用生理鹽水稀釋至 10ml，離心洗滌 2次，每次均以 1500prm, 10分鐘，棄上清后即得到純度較高的淋巴細胞，但可有少量的單核細胞。 ⒉先將 3ml人淋巴細胞分離液放入另一個離心管，然后將稀釋后的血沿試管內(nèi)壁緩緩加入到分離液面之上，勿用力過大，以免造成血液與分離液混合，保持清晰的分層狀態(tài)。 二、血液單細胞樣品的制備 血液是天然的單細胞分散細胞懸液，血中的細胞成分在生理狀態(tài)下呈分散的游離狀態(tài)，它是流式細胞分析的最合適的樣品，全血中含有紅細胞，白細胞和血小板三種有形成分，但流式細胞的檢測是以某一群細胞為測定對象，因此在檢測前須將所測的某群細胞分離出來，下面分別介紹幾種血細胞的分離制備方法。 ? 消化時間不可過長，以免造成已釋放出的細胞核被消化掉。 ⑩單細胞樣品 1 106細胞 /ml，加入熒光
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