20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀分析技術(shù)應(yīng)用-在線瀏覽
2024-11-11 18:38本頁面
【正文】 頁，共五十二頁。)直方圖點(diǎn)圖,第十四頁，共五十二頁。 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細(xì)胞(x236。 曲線層次越高(越里面的線) 所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。,第十五頁，共五十二頁。,3. 假三維等高圖,第十七頁，共五十二頁。)直方圖,第十八頁，共五十二頁。,（四）流式細(xì)胞儀的多參數(shù)(cānsh249。,Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細(xì)胞群分布選定其中想要分析的特定細(xì)胞群，并要求該樣本所有其他(q237。,根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形(jǔx237。,三、設(shè)門分析(fēnxī)技術(shù),第二十頁，共五十二頁。ng)粒細(xì)胞,A、B、C均為任意(r232。)門,第二十一頁，共五十二頁。,樣本制備 標(biāo)記染色(rǎns232。,外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備 分離單個(gè)核細(xì)胞(x236。ngpǐn)制備,第二十四頁，共五十二頁。)法 酶處理法 化學(xué)試劑處理法 表面活性劑處理法 單細(xì)胞懸液的保存 深低溫保存法（一年） 乙醇或甲醇保存法（2周） 甲醛或多聚甲醛保存法（2月）,第二十五頁，共五十二頁。,淋巴細(xì)胞： 1x HBSS(with Ca++/Mg++)含1% FBS HBSS配方中的陽離子可增加細(xì)胞的生存力。y,較黏著的細(xì)胞(sticky cells)： 提高EDTA 到 5mM 并使用透析過的FBS (against Ca++/Mg++ free PBS)。o)黏著而EDTA可抑制此作用,第二十七頁，共五十二頁。j236。離心后，用sorting buffer調(diào)整細(xì)胞濃度。,含有高比例死細(xì)胞的樣本： Sorting buffer加5mM MgCl2以及25~50 μg/mL DNAase I (Sigma D4513)或是(hu242。)Sorting buffer加0.83mM MgCl2以及20 U DNAase II (Sigma D4138)。,第二十八頁，共五十二頁。 PerCPCy5.5/APC 為弱表達(dá)(biǎod225。)染色,第二十九頁，共五十二頁。ng)選擇熒光光譜重疊小的熒光素,Minimize the potential for spectral overlap Spillover estimates available in the spectra viewer,2,第三十頁，共五十二頁。bāo)懸液,異硫氰酸熒光(y237。,常用(ch225。nɡ)的幾類熒光染料,第三十二頁，共五十二頁。)波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號(hào)，從而檢測(cè)到該特定熒光信號(hào)。h233。,488nm,575nm,670nm 紅色(h243。)熒光,花青(huā qīnɡ)苷5,藻紅蛋白(d224。i),能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制,第三十四頁，共五十二頁。ngtǐ)的使用原則,在免疫表型分析中，常常把多種熒光素標(biāo)記抗體同時(shí)組合在一起進(jìn)行多色分析，但并非多種抗體均可以自由組合在一起使用。 在單獨(dú)或組合應(yīng)用時(shí)，應(yīng)注意抗體的稀釋度。guǒ)各加20μl，總體積會(huì)增至60μl，因此每種抗體的濃度被稀釋成原來的1/3，不再是最佳用量。一種新的抗體組合設(shè)計(jì)后必須進(jìn)行這種比對(duì)試驗(yàn)，這種組合一旦應(yīng)用與臨床，不可隨便改換抗體組合或抗體的克隆。,第三十
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