20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀分析技術(shù)應(yīng)用-文庫吧資料
2024-11-11 18:38本頁面
【正文】 抗體組合最好采用同一種工藝制作的為佳。因此組合抗體應(yīng)用濃度應(yīng)比單獨(dú)抗體使用濃度高。如3種抗體單獨(dú)使用時(shí)的最佳用量為20μl，而3種抗體組合應(yīng)用時(shí)如果(r在多數(shù)熒光素標(biāo)記抗體組合應(yīng)用之前，必須將每種抗體單獨(dú)應(yīng)用和組合應(yīng)用的結(jié)果進(jìn)行比較，一旦這種組合顯示出與單獨(dú)應(yīng)用時(shí)無差別的結(jié)果時(shí)，這種組合才可以應(yīng)用于多色免疫表型分析。,多色分析時(shí)組合抗體(k224。nb225。ngs232。)染料,第三十三頁，共五十二頁。,能量傳遞復(fù)合(f249。,用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長(zhǎng)的染料結(jié)合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個(gè)熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射(fāsh232。nɡ y242。ngguāng)素,得州紅,能量傳遞復(fù)合染料,藻膽蛋白類,（一）幾種常見的熒光染料,第三十一頁，共五十二頁。,激光(jīguāng),細(xì)胞(x236。,盡量(jǐnli224。)的抗原選擇較亮的熒光素 CD62L on CD8+T 防止耦聯(lián)染料降解（光照/固定/升溫等）造成的干擾 APCCy7/PECy7,二、常用的熒光染料與標(biāo)記(biāoj236。,盡量選擇熒光光譜重疊小的熒光素 PECy5/APC amp。這些配方可減少因死細(xì)胞釋放出來的DNA所造成的細(xì)胞黏聚現(xiàn)象。 sh236。如果需要的話，可以提高EDTA的濃度(至5mM)以避免細(xì)胞重新黏聚。)不可過度作用)，便以5 ml 含5%血清培養(yǎng)液收取細(xì)胞，并均勻地打散細(xì)胞懸液。,貼壁型細(xì)胞株(Adherent cells)： 以Trypsin處理后去準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液時(shí)，待細(xì)胞變圓(切記(qi232。某些細(xì)胞在活化會(huì)比較(bǐji224。)聚集，即便配方中沒有EDTA也不會(huì)造成問題。由于這些細(xì)胞并非易于(y236。,1 Phosphate Buffer Saline or HBSS (Ca/Mg++ free) 1 mM EDTA 25 mM HEPES pH 7.0 1 % Fetal Bovine Serum (Heatinactivated),Sorting Buffer,第二十六頁，共五十二頁。,新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備 機(jī)械(jīxi232。bāo) 培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備 蛋白酶消化 機(jī)械吹打 使貼壁細(xì)胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾,一、免疫檢測(cè)樣品(y224。) 液相芯片技術(shù) 質(zhì)量控制,第四節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析(fēnxī)的技術(shù)要求,第二十三頁，共五十二頁。,線性門,第二十二頁，共五十二頁。ny236。,A 淋巴細(xì)胞 B 單核細(xì)胞 C 中性(zhōngx236。ng)門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。tā)參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細(xì)胞的分布情況。)分析,第十九頁，共五十二頁。,多參數(shù)分析(fēnxī)：當(dāng)細(xì)胞標(biāo)記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號(hào)和散射光信號(hào)可根據(jù)需要進(jìn)行組合分析(fēnxī)。,（三）三參數(shù)(cānsh249。,二維等高圖,第十六頁，共五十二頁。 等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。bāo)相對(duì)或絕對(duì)數(shù)，即“等高”。,2. 二維等高圖,由類似地圖上的等高線組成，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖。,1.雙參數(shù)(cānsh249。,（二）雙參數(shù)(cānsh249。nh224
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