流式細(xì)胞儀分析ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-07 06:44本頁(yè)面
【正文】 PH對(duì)熒光發(fā)射強(qiáng)度的影響 熒光染料濃度的控制 固定劑對(duì)免疫熒光染色的影響 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 30 ㈢ 儀器操作技術(shù)的質(zhì)量控制 光路與流路校正 PMT校準(zhǔn) 絕對(duì)計(jì)數(shù)的校準(zhǔn) 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 31 ㈣ 免疫檢測(cè)的質(zhì)量控制 同型對(duì)照：為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對(duì)照。 ⑴ 直接免疫熒光染色法 ⑵ 間接免疫熒光染色法 ⑶ 雙參數(shù)或多參數(shù)分析時(shí)熒光抗體的組合技術(shù) 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 27 ㈢ 細(xì)胞自發(fā)熒光 大部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的吡啶或黃素類核苷酸都存在自發(fā)熒光，用紫外光或藍(lán)光激發(fā)可藍(lán)色或綠色熒光。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 26 熒光標(biāo)記抗體特異性結(jié)合方式：熒光分子與單克隆抗體的 F（ ab） ’2片段氨基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而形成熒光標(biāo)記基團(tuán)。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 25 ㈡ 免疫熒光標(biāo)記 熒光染料與細(xì)胞成分結(jié)合的方式： 結(jié)構(gòu)親和式：以電力結(jié)合，為帶正電荷的熒光分子與帶負(fù)電荷的核酸分子磷酸基團(tuán)相互吸引 嵌入結(jié)合方式：光分子直接嵌入核酸堿基對(duì)中。 羅丹明：發(fā)紅色熒光，缺點(diǎn)是不易溶于水。 ㈣ 單細(xì)胞懸液的保存 深低溫保存法 乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛保存法 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 23 二、免疫分析中常用的 熒光染料與標(biāo)記染色 ㈠ 常用的熒光染料 熒光染料需具備條件： 有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)； 對(duì) 488nm的激發(fā)光波長(zhǎng)有較強(qiáng)的吸收； 發(fā)射光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)之間有較大的波長(zhǎng)差； 不影響結(jié)合抗體自身的特異性。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 20 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 略！ 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 21 第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫 分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測(cè)樣品制備 制備單細(xì)胞懸液是最關(guān)鍵的第一步。 分選得率：是指從一群體細(xì)胞懸液中分辨出的目的細(xì)胞總量，再經(jīng)分選后獲得的目的細(xì)胞實(shí)際比率。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 19 分選收獲率：指設(shè)定通過測(cè)量點(diǎn)的分選細(xì)胞與實(shí)際收獲的分選細(xì)胞之間的比率。 （圖 14） （圖 9） 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 18 ㈡ 技術(shù)要求 分選速度：至少 5000個(gè) /秒，與分選細(xì)胞在懸液中的含量有關(guān)。 2022/5/29 檢驗(yàn)本科 16 ㈡ 熒光補(bǔ)償 （圖 8） 通常用熒光補(bǔ)償?shù)姆椒▉硐?
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